Nyckelskillnaden mellan HPLC och UPLC är att HPLC möjliggör analys av partiklar med en storlek på runt 5 mikrometer medan UPLC tillåter mycket mindre partiklar runt 2 mikrometer.
HPLC och UPLC är båda vätskekromatografiska tekniker som är användbara för att separera komponenterna i en förening. För att veta skillnaden mellan HPLC och UPLC måste vi först veta vad HPLC är. Detta beror på att UPLC är en specialversion av HPLC och vi kan lätt förstå det om vi vet vad HPLC är.
Vad är HPLC?
Termen HPLC står för High Performance Liquid Chromatography. Det är en teknik som vi kan använda för att separera olika beståndsdelar i en förening. Det är också den mest använda tekniken för att identifiera, kvantifiera och separera komponenter i en blandning. Dessutom använder denna teknik ett högt tryck för att trycka lösningsmedel genom kolonnen. Dessutom är de viktigaste tillämpningarna av HPLC inom biokemi för analys av beståndsdelar i en förening. Det är ett idealiskt sätt för separation och identifiering av aminosyror, nukleinsyror, proteiner, kolväten, bekämpningsmedel, kolhydrater, antibiotika, steroider och otaliga andra oorganiska ämnen.
Figur 01: HPLC-system i ett laboratorium
I korthet är arbetssättet för HPLC-tekniken följande. För det första bör vi införa provet i strömmen av mobil fas i diskreta små mängder med hjälp av en pump. Pumptrycket bör hållas vid 40 MPa. Sedan sipprar denna ström av mobil fas genom HPLC-kolonnen. Dessutom passerar komponenterna i provet genom kolonnen. Men deras rörelsehastigheter skiljer sig från varandra. Denna skillnad uppstår på grund av skillnaden i växelverkan mellan provkomponenterna och adsorbenten inuti kolonnen. Vi kallar denna adsorbent som den stationära fasen eftersom den finns inuti kolonnen (ej rörlig). För det andra, i slutet av kolonnen, kan vi samla provet som eluerar från kolonnen. Där kan vi fastställa skillnaderna i retentionstider för varje komponent i provet.
Vad är UPLC?
Termen UPLC står för Ultra High-Performance Liquid Chromatography. Det är en variant av HPLC, men arbetsmetoden är densamma. Men till skillnad från HPLC tillåter denna metod att mycket små partiklar kan analyseras, såsom 2 mikrometer små partiklar.
Figur 02: En UPLC-enhet
Dessutom ger det en snabbare analys. I denna teknik använder vi ett 100 MPa pumptryck för införandet av provet i kolonnen. Följaktligen bekräftar detta höga tryck att hela provet införs i kolonnen. Detta är alltså mycket effektivt jämfört med HPLC.
Vad är skillnaden mellan HPLC och UPLC?
Termen HPLC står för High Performance Liquid Chromatography medan termen UPLC står för Ultra High Performance Liquid Chromatography. Därför är UPLC-tekniken en utvecklad version av HPLC. Sålunda är arbetsmetoden densamma för båda teknikerna. UPLC är dock effektivare jämfört med HPLC eftersom den använder ett högt pumptryck; pumptrycket för HPLC är 40 MPA medan det är 100 MPa för UPLC. Därför är detta en skillnad mellan HPLC och UPLC. Framför allt är den viktigaste skillnaden mellan HPLC och UPLC att HPLC möjliggör analys av partiklar med en storlek på cirka 5 mikrometer medan UPLC tillåter mycket mindre partiklar runt 2 mikrometer.
Sammanfattning – HPLC vs UPLC
UPLC är en form av HPLC. Operationsmetoderna är alltså desamma. Men vi kan hitta några förbättrade funktioner i UPLC jämfört med HPLC. Därför finns det en viss skillnad mellan HPLC och UPLC. Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och UPLC är dock att HPLC möjliggör analys av partiklar med en storlek på cirka 5 mikrometer medan UPLC tillåter mycket mindre partiklar runt 2 mikrometer.
