Nyckelskillnaden FPLC och HPLC är att FPLC är en typ av vätskekromatografi som renar stora biomolekyler som proteiner, nukleotider och peptider, medan HPLC är en typ av vätskekromatografi som separerar föreningar med liten molekylvikt.
Vätskekromatografi är en teknik som används för att separera ett prov i dess individuella komponenter. Denna separation uppstår på grund av interaktionen av specifika prover med mobila och stationära faser. Komponenter i ett prov separeras baserat på varje komponents affinitet för den mobila fasen i vätskekromatografi. När den mobila fasen och provet passerar genom en kolonn börjar provets komponenter separeras i band som kan detekteras med UV-VIS-spektroskopi. Därför är FPLC och HPLC två typer av vätskekromatografitekniker.
Vad är FPLC?
FPLC är en typ av vätskekromatografi som renar stora biomolekyler som proteiner, nukleotider och peptider. Den snabba proteinvätskekromatografin (FPLC) utvecklades och marknadsfördes först i Sverige av Pharmacia 1982. Den används ofta för att analysera eller rena proteinblandningar. Detta sker baserat på principen om provkomponenters affinitet för rörlig vätska (rörlig fas) och ett poröst fast material (stationär fas). I FPLC är den mobila fasen en buffert, och den stationära fasen är ett harts som består av pärlor. Den består vanligtvis av tvärbunden agaros packad i en cylindrisk glas- eller plastkolonn.
Figur 01: FLPC-apparat (Fast Protein Liquid Chromatography)
I större delen av FLPC-strategin används jonbytarharts. Därför kommer proteinet av intresse att binda till hartset genom en laddningsinteraktion. FLPC-tekniken använder också två buffertar: buffert 1 (körbufferten) och buffert 2 (elueringsbufferten). Inledningsvis, när buffert och provblandning körs genom kolonnen, kommer proteinet av intresse i blandningen att binda till hartset genom en laddningsinteraktion. Men proteinet av intresse dissocieras och återgår till lösningen i elueringsbufferten när elueringsbufferten rinner genom kolonnen i slutet av processen. Senare passerar lösningen (elueringsmedel som innehåller protein av intresse) genom två detektorer, som mäter s altkoncentration och proteinkoncentration. När varje protein elueras visas det som en "topp" under detektionen och kan samlas in för vidare användning.
Vad är HPLC?
HPLC är en typ av vätskekromatografi som separerar föreningar med låg molekylvikt. 1969 tillverkades den första HPLC:n kommersiellt av Waters Corporation, USA. Vid högpresterande vätskekromatografi (HPLC) pumpas en provblandning (analyt) i ett lösningsmedel (mobil fas) genom en kolonn med kromatografiskt packningsmaterial (stationär fas) vid högt tryck. Provblandningen bärs av en rörlig bärgasström av helium eller kväve.
Figur 02: HPLC (High-Performance Liquid Chromatography)
De komponenter i provblandningen som har minst interaktion med den stationära fasen eller mest interaktion med den mobila fasen kommer att lämna kolonnen snabbare. Å andra sidan kommer komponenterna i provblandningen som har den största mängden interaktion med den stationära fasen eller minsta mängden interaktion med den mobila fasen att lämna kolonnen långsammare. Baserat på ovanstående interaktionsprincip kan komponenterna i provblandningen separeras. Dessutom identifierar instrumentdetektorn varje komponent i provblandningen som lämnar kolonnen. HPLC används för att inspektera miljö- och biologiska prover för närvaro eller frånvaro av kända föreningar, såsom läkemedel, toxiner eller bekämpningsmedel. Det används i olika branscher som läkemedel, miljö, krimin alteknik och kemikalier.
Vilka är likheterna mellan FPLC och HPLC?
- FPLC och HPLC är typer av vätskekromatografi.
- Båda används för att separera och identifiera biologiska prover.
- De har en flytande mobil fas och en fast stationär fas.
- Båda teknikerna använder en kolumn för att passera genom provet.
- De här teknikerna använder pumpar, detektorer, ventiler och programvara för provseparering och detektion.
Vad är skillnaden mellan FPLC och HPLC?
FPLC är en typ av vätskekromatografi som används för att rena stora biomolekyler som proteiner, nukleotider och peptider. HPLC är en typ av vätskekromatografi som används för att separera föreningar med låg molekylvikt. Så detta är nyckelskillnaden mellan FPLC och HPLC. Dessutom använder FPLC pH- och konduktivitetsmätare samt fraktionssamlare. Däremot använder HPLC inte pH- och konduktivitetsmätare och fraktionssamlare.
Infografiken nedan listar fler skillnader mellan FPLC och HPLC i tabellform.
Sammanfattning – FPLC vs HPLC
Kromatografi är en laboratorieanalysteknik som används för att separera komponenter från en blandning. Den är uppdelad i flera typer såsom kolonnkromatografi, gaskromatografi, vätskekromatografi, jonbyteskromatografi, etc. FPLC och HPLC är två typer av vätskekromatografitekniker. FPLC är en typ av vätskekromatografi som används för att rena stora biomolekyler som proteiner, nukleotider och peptider. Å andra sidan är HPLC en typ av vätskekromatografi som används för att separera föreningar med liten molekylvikt. Detta är alltså sammanfattningen av vad som är skillnaden mellan FPLC och HPLC.
