Nyckelskillnaden mellan RP HPLC och HIC är att RP HPLC använder en mer polär mobil fas och en mindre polär stationär fas. Medan HIC använder en hydrofob stationär fas som gör att de hydrofoba molekylerna kan fästa vid den.
Kromatografi är en analysteknik som hjälper till att separera en blandning i dess komponenter. Först måste vi lösa upp provet som ska separeras i en lösning. Denna lösning-ämnesblandning kallas den mobila fasen. Sedan leds den mobila fasen genom ett annat material som kallas den stationära fasen. Den stationära fasen bestämmer separationen av komponenterna. Separationen sker på grund av uppdelningen av material mellan den mobila fasen och den stationära fasen.
Vad är RP HPLC?
Termen RP HPLC står för Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Det innebär separation av komponenter i en blandning, enligt hydrofobicitet. De hydrofoba komponenterna i den mobila fasen länkar till de immobiliserade hydrofoba liganderna på den stationära fasen, medan hydrofila komponenter eluerar genom den stationära fasen utan att fästa vid ytan av den stationära fasen.
Figur 01: HPLC-apparat
Dessutom har denna metod mer reproducerbarhet jämfört med andra kromatografiska tekniker, och den visar också bred tillämpbarhet. Därför använder vi denna metod i laboratorier för över 75 % av alla HPLC-metoder. För det mesta använder vi en vattenh altig blandning av vatten med ett blandbart polärt organiskt lösningsmedel som den mobila fasen. Således kommer det att säkerställa vidhäftningen av de hydrofoba komponenterna i lösningen till ytan av den stationära fasen.
Vad är HIC?
Termen HIC står för Hydrophobic Interaction Chromatography. Det är en typ av omvänd fas HPLC, och denna metod används främst för separation av stora biomolekyler som proteiner. I denna metod måste vi använda ett vattenh altigt medium för att göra provet av biomolekylen. Det beror på att organiska lösningsmedel kan orsaka denaturering av proteinerna. Dessutom använder denna teknik interaktionen mellan stora molekyler med en något hydrofob yta av den stationära fasen. Dessutom måste vi använda en hög s altkoncentration i provet eftersom det uppmuntrar proteinet att behållas på förpackningen; denna process kallas uts altning. Genom att minska s altkoncentrationen gradvis kan vi få biomolekylerna att eluera separat beroende på deras hydrofobicitet.
Vanligtvis använder den här metoden förhållanden som är motsatta de för jonbyteskromatografi. I denna teknik måste vi först passera en buffertlösning genom kolonnen för att minska solvatiseringen av löst ämne i provet. Det gör att de hydrofoba områdena av proteinet exponeras. Men när molekylen är mer hydrofob krävs mindre s alt för att främja bindningen. Här elueras de mindre hydrofoba lösta ämnena först, och enligt förändringen i s altkoncentration elueras fler hydrofoba lösta ämnen sist.
Vad är skillnaden mellan RP HPLC och HIC?
Kromatografi är en analysteknik för att separera komponenter i en blandning. RP HPLC och HIC är två specialiserade kromatografiska tekniker. Den viktigaste skillnaden mellan RP HPLC och HIC är att RP HPLC använder en mer polär mobil fas och mindre polär stationär fas, medan HIC använder en hydrofob stationär fas, vilket gör att de hydrofoba molekylerna kan fästa på den.
Infografiken nedan sammanfattar skillnaden mellan RP HPLC och HIC.
Sammanfattning – RP HPLC vs. HIC
Kromatografi är en analysteknik för att separera komponenter i en blandning. RP HPLC och HIC är två specialiserade kromatografiska tekniker. Den viktigaste skillnaden mellan RP HPLC och HIC är att RP HPLC använder en mer polär mobil fas och en mindre polär stationär fas, medan HIC använder en hydrofob stationär fas, som gör att de hydrofoba molekylerna kan fästa till den.
