Nyckelskillnaden mellan HPLC med omvänd fas och normal fas är att HPLC med omvänd fas använder en opolär stationär fas och en polär mobil fas medan HPLC med normal fas använder en polär stationär fas och en mindre polär mobil fas.
HPLC i normalfas är den äldsta tekniken för HPLC som Tswett använde i sin separation av växtextrakt; han använde krita i en glaspelare. Detta var det klassiska sättet för kromatografi som ledde till att det kallades den "normala" tekniken. Omvänd fas HPLC, å andra sidan, är motsatsen till den normala tekniken, som forskare utvecklat på sistone.
Vad är omvänd fas HPLC?
Omvänd fas HPLC är en kromatografisk teknik där vi använder en hydrofob stationär fas. Bland alla HPLC-metoder använder vi denna metod till cirka 70 % på grund av dess breda tillämpbarhet och reproducerbarhet. Den stationära fasen är opolär och den mobila fasen är polär.
De flesta gånger använder forskare en vattenh altig blandning av vatten med ett blandbart, polärt organiskt lösningsmedel, som acetonitril eller metanol som den mobila fasen. Därför interagerar analyterna med den opolära stationära fasen.
Vad är normalfas-HPLC?
HPLC i normalfas är en kromatografisk teknik där vi använder en hydrofil stationär fas. Det är den traditionella metoden för HPLC, även om vi inte använder den så mycket. Den stationära fasen är polär och den mobila fasen är opolär. Ännu viktigare är att den mobila fasen av denna teknik är 100 % organisk. Det betyder att inget vatten används för detta.
Figur 01: En provprofil för normalfas- och omvändfas-HPLC-kromatogram enligt polariteten hos komponenterna i analyten.
Vanligtvis innehåller den stationära fasen kiseldioxid, cyano, diol, aminobundna faser, etc. Mobila faser inkluderar organiska lösningsmedel som hexan, etylacetat, etc. Denna teknik bygger på retention av lösningsmedels- eller analytmolekyler på polär stationär fas.
Vad är skillnaden mellan omvänd fas och normal fas HPLC?
Omvänd fas HPLC är en kromatografisk teknik där vi använder en hydrofob stationär fas. Den stationära fasen av denna teknik är opolär medan den mobila fasen är polär. Dessutom använder forskare en vattenh altig blandning av vatten med ett blandbart, polärt organiskt lösningsmedel, såsom acetonitril eller metanol, som den mobila fasen i omvänd fas HPLC. Däremot är normalfas-HPLC en kromatografisk teknik där vi använder en hydrofil stationär fas. Den stationära fasen av denna teknik är polär medan den mobila fasen är opolär. Utöver det använder forskare organiska lösningsmedel som hexan, etylacetat, etc. som den mobila fasen av normalfas HPLC. Infografiken nedan visar skillnaden mellan omvänd fas och normalfas HPLC i tabellform.
Sammanfattning – omvänd fas vs normal fas HPLC
Omvänd fas och normalfas HPLC-tekniker är två vätskekromatografiska tekniker. Nyckelskillnaden mellan HPLC med omvänd fas och normal fas är att HPLC med omvänd fas använder en opolär stationär fas och en polär mobil fas medan HPLC med normal fas använder en polär stationär fas och en mindre polär mobil fas.
