Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och snabb HPLC är att pumptrycket som vi använder för HPLC är cirka 40 MPa medan pumptrycket för snabb HPLC är cirka 3-5 MPa.
Den vanligaste tekniken som vi använder för att separera komponenter i en blandning är "vätskekromatografi". Det finns flera tekniker för att uppnå detta syfte av vilka HPLC är mycket populärt. HPLC står för High Performance Liquid Chromatography som identifierar, kvantifierar och separerar komponenter i en vätskeblandning på ett snabbt och effektivt sätt. Fast HPLC är en speciell tillämpning av HPLC som på senare tid har fångat uppmärksamheten hos dem som är involverade i studier av lösningar.
Vad är HPLC?
HPLC är högpresterande vätskekromatografi. Den använder ett högt tryck för att trycka lösningsmedel så att de passerar genom en kolonn. Det är också ett idealiskt sätt att separera och studera olika föreningar som aminosyror, nukleinsyror, kolhydrater, steroider, antibiotika och kolväten. HPLC har många fördelar jämfört med andra metoder för separation av blandningar såsom högre upplösning och snabbare analys. Det utplånar behovet av ompackning och regenerering och ger bättre kontroll över parametrar och ökar därmed effektiviteten av separationen. Helst lämpar sig HPLC för storskaliga tillämpningar eftersom den kan separera mycket små partiklar och tillåter användning av höga tryck som gör det lätt för lösningsmedel att flöda lätt.
Figur 01: HPLC-kolumn
I korthet är arbetssättet för HPLC-tekniken följande. Först bör vi införa provet i strömmen av mobil fas i diskreta små mängder med hjälp av en pump. Pumptrycket bör hållas vid 40 MPa. Denna ström av mobil fas sipprar genom kolonnen av HPLC. Sedan passerar även komponenterna i provet genom kolonnen. Deras rörelsehastigheter skiljer sig emellertid från varandra på grund av skillnaden i växelverkan mellan provkomponenterna och adsorbenten inuti kolonnen. Vi kallar denna adsorbent som den stationära fasen eftersom den finns inuti kolonnen (ej rörlig). Sedan, i slutet av kolonnen, kan vi samla provet som eluerar från kolonnen, och därigenom kan vi samla in komponenterna i provet separat.
Vad är Fast HPLC?
Nyligen utvecklade forskare vid forskningsinstitutet Schering Plough en snabb HPLC-teknik som är en avancerad version av HPLC eftersom den möjliggör ännu snabbare separation av föreningar från en blandning. Även känd som snabb HPLC, använder denna teknik en 2,7 um smält kärna kiseldioxidpartiklar som tillverkas genom att smälta 0,5 um porös kiseldioxid över en fast kiseldioxidpartikel. Dessa unikt tillverkade partiklar gör separationsproceduren mycket snabb och det även vid lågt mottryck än vad vi använder i HPLC.
Figur 02: FPLC-apparat
Snabb HPLC ger resultat som är jämförbara med UPLC, men forskare anser att denna teknik är överlägsen eftersom den inte kräver mycket dyr ultrahögtrycksutrustning. Vad som är bra är att snabb HPLC inte kräver några nya laboratorieprotokoll.
Vad är skillnaden mellan HPLC och snabb HPLC?
HPLC är högpresterande vätskekromatografi och snabb HPLC är en avancerad form av högpresterande vätskekromatografi. Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och snabb HPLC är att pumptrycket som vi använder för HPLC är cirka 40 MPa. Medan pumptrycket för snabb HPLC är cirka 3-5 MPa. Vidare kan vi separera olika föreningar såsom aminosyror, nukleinsyror, kolhydrater, steroider, antibiotika och kolväten med hjälp av HPLC-tekniken medan den snabba HPLC-tekniken främst används för separation av proteiner.
Infografiken nedan visar mer information om skillnaden mellan HPLC och snabb HPLC.
Sammanfattning – HPLC vs Fast HPLC
HPLC är en teknik för vätskekromatografi som har blivit mycket populär över hela världen. Fast HPLC är en ny version av HPLC, forskare vid Schering Plough Institute utvecklade denna nya teknik. Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och snabb HPLC ligger på pumptrycket som vi använder för separationen. Det är; pumptrycket som vi använder för HPLC är runt 40 MPa. Men pumptrycket för snabb HPLC är cirka 3-5 MPa.
