nyckelskillnad – transient vs stabil transfektion
Transfektion är en process som är involverad i genöverföringen av eukaryota celler med hjälp av kemiska eller fysikaliska metoder. Transfektion kan klassificeras i två huvudtyper som kallas transient transfektion och stabil transfektion. Under transient transfektion misslyckas genen av intresse att integreras med värdgenomet och uttrycks temporärt inom värden under en kort tid, medan, vid stabil transfektion, integreras genen av intresse med värdgenomet och bibehålls under lång tid i flera generationer. Detta är nyckelskillnaden mellan transient och stabil transfektion. I båda fallen är transfektion framgångsrik och gener uttrycks.
Vad är transient transfektion?
Transfektion är ett viktigt verktyg för att infoga gener i eukaryota celler. Bland de två typerna av transfektion är transient transfektion ett vanligt sätt vid genöverföring. Genom en vektor transformeras främmande gener inuti värdceller. När främmande DNA kommer in i värdcellen har den två alternativ. Det kan antingen integreras med värdgenomet och replikera, eller stanna inne utan att integreras i genomet. Övergående transfektion uppvisar det tillfälliga uttrycket av de insatta generna utan att integreras i värdgenomet. Gener uttrycker och producerar det kodade proteinet tills cellen delar sig. Men på grund av oförmågan till integration kan den inte replikera och komma in i framtida generationer. Denna typ av transfektion är framgångsrik under en kort tidsperiod. Under celldelningen eller på grund av några andra faktorer utsätts främmande DNA för nedbrytning. Övergående transfektion visas när det främmande DNA:t är i form av högt upprullat DNA.
Figur 01: Transient Transfection
Vad är stabil transfektion?
Stabil transfektion visar framgångsrik integrering av främmande gen i värdgenomet. När främmande DNA kommer in i värdcellen, integreras en del av det främmande DNA:t med värdgenomet och blir en del av det. Därför replikerar främmande DNA också och går över till framtida generationer när värdgenomet replikerar. Denna typ av transfektion är komplex och sällsynt. Men på grund av den stabila transfektionen in i genomet bibehålls denna egenskap under en längre period av flera generationer.
Stabil transfektion är en svår process och kräver en effektiv leverans av DNA och cellförvärv av det främmande DNA:t till dess genom. Därför gynnar linjärt DNA den stabila transfektionen än cirkulärt DNA. Stabil transfektionshastighet är emellertid ungefär en av 104 transformerade celler. Stabil transfektion kan observeras genom samtransfomering av en valbar markör och genom att utföra det artificiella urvalet på ett medium.
Figur 02: Stabil transfektion
Vad är skillnaden mellan transient och stabil transfektion?
Transient vs Stable Transfection |
|
| Främmande DNA integreras inte i ett värdgenom. | Främmande DNA integreras med värdgenomet och blir en del av det. |
| Replikering inom värden | |
| Transient transfekterade gener replikerar inte inom värden. Därför överförs inte gener till nästa generationer. | Gener replikeras inom värden och skickas till framtida generationer. |
| Tidslängd för genuttrycket | |
| Gener uttrycks under en begränsad tidsperiod och efter det förstörs de. | Gener blir en del av genomet och uttrycks inom generationen under en lång tidsperiod. |
| Använd | |
| Detta är användbart för att studera effekterna av korttidsuttryck av gener eller genprodukter. | Detta är användbart för att studera effekterna av genuttryck på lång sikt. |
| Detektering av transfektionen | |
| Gener uttrycks och kan lätt upptäckas genom att infoga en reportergen. | Stabil transfektion kan lätt upptäckas genom att infoga en valbar markör och välja genom artificiellt urval på media. |
| Förekomst och process | |
| Transient transfektion är vanligt och inte komplicerat att utföra. | Stabil transfektion förekommer sällsynt och komplicerad att utföra. |
| DNAs natur | |
| Högt supercoiled DNA är lämpligt för transient transfektion. | Linjärt DNA är lämpligt för stabil transfektion. |
| Applications | |
| Detta används för studier av gennedbrytning eller tystnad med hämmande RNA, proteinproduktion i liten skala | Detta används för proteinproduktion i storskaliga, långsiktiga farmakologiska studier, genterapi, forskning om mekanismerna för långsiktig genetisk reglering |
Sammanfattning – Transient kontra stabil transfektion
Transienta och stabila transfektioner är två typer av transfektioner som visas under genen som överförs till eukaryota celler av icke-viralbaserade system. Transformerat främmande DNA integreras inte med värdgenomet i transient transfektion medan det integreras med värdgenomet i stabil transfektion. Cirkulärt lindat DNA visas övergående transfektion medan linjärt DNA föredrar stabil transfektion. Detta är skillnaden mellan transient och stabil transfektion. Emellertid är transient transfektion vanligare och lättare jämfört med stabil transfektion. Men valet av en bland två beror på syftet med genöverföringen och varaktigheten av forskningsprojektet.
