Nyckelskillnad – Hybridisering på plats vs immunhistokemi
Cancer- och infektionssjukdomsdiagnostik är en populär trend där nya proteomik- och genomikbaserade tekniker används i syfte att identifiera tumörer eller infektionsceller, dess spridning och platser för cellutveckling och analysera den genetiska grunden för de flesta smittsamma och icke smittsamma sjukdomar. Detta kommer att resultera i korrekt läkemedelsbearbetning och design och i utveckling av skräddarsydda behandlingar för sjukdomar. In situ hybridisering (ISH) och Immunohistokemi (IHC) är två så allmänt använda tekniker inom cancerbiologi och nyckelskillnaden mellan in situ hybridisering och immunkemi ligger i molekylerna som används i analysproceduren. I ISH används nukleinsyrasonderna i analys medan i IHC används monoklonala och polyklonala antikroppar för de diagnostiska bestämningarna.
Vad är In Situ Hybridization (ISH)?
Hybridisering in situ är en nukleinsyrahybridiseringsteknik som utförs direkt på en del eller sektion av vävnaden, i hela vävnaden eller i celler. Tekniken beror på teorin om Watson Cricks komplementära basparning, vilket resulterar i antingen DNA-DNA-hybrider eller DNA-RNA-hybrider som kan detektera muterade gener eller identifiera den gen som krävs av intresse. Enkelsträngade DNA-sekvenser, dubbelsträngade DNA-sekvenser, enkelsträngade RNA-sekvenser eller syntetiska oligonukleotidsekvenser används som sönder under hybridiseringsteknik, och dessa sönder är märkta med en radioaktiv fosfor vid dess 5'-ände för identifieringsprocedurer vid autoradiografi eller märkta med fluorescerande färgämnen. Det finns olika typer av ISH-tekniker tillgängliga baserat på vilken typ av sond som används och vilken typ av visualiseringsteknik som följs.
Figur 01: Fluorescerande in situ-hybridisering
Det finns många tillämpningar av ISH, främst inom molekylär diagnostik av infektionssjukdomar för att identifiera förekomsten av patogener och för att bekräfta patogenen via molekylär diagnostik. Det används också inom områdena utvecklingsbiologi, karyotypning och fylogenetisk analys och fysisk kartläggning av kromosomer.
Vad är immunhistokemi (IHC)?
I IHC-tekniken är den huvudsakliga molekylen som analyseras antigenet. Under IHC används monoklonala och polyklonala antikroppar för att bestämma närvaron av antigener vid infektion eller maligna celltillväxtstatus. Tekniken är baserad på antigen-antikroppsbindning, och enzymmärkningar används för denna teknik; en sådan tillämpning är ELISA (Enzyme linked immunosorbent assay). Markörerna kan också vara fluorescensmärkta antikroppar eller radiomärkta antikroppar.
Figur 02: Immunhistokemi
IHC används ofta för upptäckt av cancerceller. De diagnostiska procedurerna riktar sig mot antigenerna som finns på tumörcellerna för att identifiera och karakterisera tumören. Samma procedur är införlivad för att diagnostisera smittämnen. Monoklonala och polyklonala antikroppar används också för att analysera olika genprodukter genom att möjliggöra antikropp-antigenbindningsreaktionen mellan det önskade proteinet och den syntetiska antikroppen som administreras.
Vilka är likheterna mellan in situ-hybridisering och immunhistokemi?
- ISH och IHC är mycket specifika reaktioner.
- Båda teknikerna är mycket exakta.
- Båda teknikerna kan användas i diagnostik för cancer och infektionssjukdomar.
- Dessa tekniker utförs i sterila in vitro-miljöer.
- Båda är snabba tekniker som ger reproducerbara resultat.
- ISH och IHC använder detektionsmetoder som radiomärkning och fluorescenstekniker.
Vad är skillnaden mellan in situ-hybridisering och immunhistokemi?
Hybridisering på plats vs immunhistokemi |
|
| ISH är en nukleinsyrahybridiseringsteknik som utförs direkt på en del eller sektion av vävnaden eller hela vävnaden. | IHC är en teknik där monoklonala och polyklonala antikroppar används för att bestämma närvaron av antigener, som är speciella proteinmarkörer placerade på cellytorna. |
| Typ av analyserade biomolekyler | |
| ISH analyserar nukleinsyror. | IHC analyserar proteiner-antigener. |
| Basis of Biochemical Reaction | |
| Komplementär basparning mellan DNA-DNA eller DNA-RNA förekommer i denna teknik. | Antigen-antikroppsinteraktioner är involverade i immunhistokemi. |
| Enzymlänkade detektionsmetoder | |
| Enzymlänkade detektionsmetoder kan inte användas i ISH. | Enzymlänkade detektionsmetoder kan användas i IHC. |
Sammanfattning – Hybridisering på plats vs immunhistokemi
Molekylär diagnostik är snabba och bekräftande metoder som kan användas för att identifiera en icke-smittsam sjukdom som cancer eller smittsam sjukdom som HIV eller tuberkulos baserat på de molekylära markörer som finns på cellerna som leder till sjukdomens manifestation. Molekylära markörer kan vara närvarande i form av uttryckta proteiner eller på genetisk nivå baserat på vilken olika nya tekniker introduceras för att öka effektiviteten och är mindre arbetskrävande, även om det är en hög kostnad involverad med dessa tekniker. Således beror ISH på DNA-DNA- eller DNA-RNA-hybridbildning, och IHC beror på de specifika reaktionerna mellan antikropp och antigen. Detta är skillnaden mellan in situ hybridisering.
Ladda ned PDF-version av In Situ Hybridization vs Immunohistochemistry
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan in situ hybridisering och immunhistokemi.
