nyckelskillnad – immunfluorescens vs immunhistokemi
Sjukdomsdiagnostik, som använder molekylärbiologiska metoder, har blivit ett framväxande område inom den kliniska laboratorietekniken. Den inkluderar alla tester och metoder för att identifiera en sjukdom och förstå orsaken till en sjukdom genom att analysera DNA, RNA eller uttryckta proteiner i en organism. Snabba framsteg inom molekylär diagnostik har möjliggjort grundforskning om smittsamma och icke-smittsamma sjukdomar. Dessa används för att bestämma förändringar i sekvens eller uttrycksnivåer i avgörande gener eller proteiner involverade i sjukdom. Immunfluorescens (IF) och Immunohistokemi (IHC) är två sådana mycket använda tekniker inom cancerbiologi. IF är en typ av IHC där en fluorescensdetektionsmetod används för att analysera monoklonala och polyklonala antikroppar, medan IHC använder kemiska metoder för att detektera de monoklonala och polyklonala antikropparna. Detta är den viktigaste skillnaden mellan IF och IHC.
Vad är immunfluorescens (IF)?
Immunofluorescens är en detektionsteknik där antikropparna som används i analysen märks med fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektionsändamålet. Märkta sekundära antikroppar kan resultera i oönskade bakgrundssignaler; därför är IF-tekniken baserad på märkning av själva den primära antikroppen för närvarande för att undvika oönskade signaler under detektion. Genom denna teknik förhindras ospecifik bindning mellan den primära och den sekundära antikroppen, och den går snabbare eftersom det inte finns något sekundärt inkubationssteg inblandat. Datakvaliteten är också förbättrad.
Figur 01: Dubbel immunofluorescensfärgning för BrdU, NeuN och GFAP
Fluorokromer eller fluorescerande färgämnen är föreningar som kan absorbera strålning, helst ultraviolett strålning som exciteras. När partiklarna når grundtillståndet från det exciterade tillståndet avger de strålning som fångas upp och detekteras av en detektor för att bilda ett spektrum. Det är av stor vikt att den fluorescerande märkningen är kompatibel och stabil för den specifika reaktionen och den bör vara korrekt konjugerad till antikroppen för att erhålla exakta resultat. En av de mest använda fluorokromerna är fluoresceinisotiocyanat (FITC), som är av grön färg, med absorptions- och emissionstoppvåglängder på 490 nm respektive 520 nm. Rhodamine, ett annat medel som används i IF, är röd till färgen och har distinkta absorptions- och emissionstoppvåglängder på 553 nm och 627 nm.
Vad är immunhistokemi (IHC)?
IHC är en molekylär testmetod som används för att identifiera och bekräfta närvaron av antigenet i målcellen. Målcellen kan vara en infektiös partikel, en mikrobiell patogen eller en malign tumörcell. IHC använder monoklonala och polyklonala antikroppar för att bestämma närvaron av antigener som finns på cellytan av målcellerna. Tekniken är baserad på antigen-antikroppsbindning. En detektionsmarkör är konjugerad till dessa antikroppar för att detektera närvaron eller frånvaron av det speciella antigenet. Dessa markörer kan vara kemiska markörer som enzymer, fluorescensmärkta antikroppar eller radiomärkta antikroppar.
Figur 02: Mus-hjärna-skiva färgad med immunhistokemi
Den mest populära tillämpningen av IHC är inom cancercellbiologi för att identifiera förekomsten av maligna tumörer, men den används också för att upptäcka infektionssjukdomar.
Vilka är likheterna mellan immunfluorescens och immunhistokemi?
- Immunofluorescens och immunhistokemi äger rum under in vitro-förhållanden.
- Båda teknikerna är baserade på antigen-antikroppen
- Båda är mycket snabba tekniker.
- Resultaten av teknikerna är reproducerbara.
- Båda har förbättrad datakvalitet.
- Dessa tekniker som används i diagnostik för cancer och infektionssjukdomar.
Vad är skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi?
Immunofluorescens vs immunohistokemi |
|
| IF är en detektionsteknik där antikropparna som används i analysen märks med fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektion. | IHC är en detektionsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med kemikalier eller radioaktiva ämnen för detektion. |
| Noggrannhet | |
| Noggrannheten är högre i IF-teknik jämfört med IHC. | Noggrannheten är lägre i IHC. |
| Specificity | |
| IF är mer specifik. | IHC är mindre specifik. |
Sammanfattning – Immunofluorescens vs Immunohistokemi
Molekylära mekanismer har åstadkommit många förändringar inom medicinområdet, vilket gett upphov till avancerade molekylära testmetoder som har lett till revolutioner inom diagnostikområdet. Dessa uppfinningar har lett till en snabb och exakt identifiering och bekräftelse av sjukdomen, vilket möjliggör framgångsrik administrering och produktion av läkemedel. Dessa tekniker används också inom farmakologi för att hitta målen för läkemedel och för att bekräfta läkemedlets farmakokinetiska egenskaper under läkemedelsmetabolism. IF och IHC är två diagnostiska metoder som är baserade på konceptet antigen- och antikroppsbindning, även om detektionssättet i båda teknikerna skiljer sig åt. IF använder principen om fluorescens för att detektera antigenet och IHC använder konceptet med kemisk konjugation för att detektera antigenet. Det här är skillnaden mellan IF och IHC.
Ladda ner PDF-version av Immunofluorescence vs Immunohistochemistry
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi.
