Nyckelskillnaden mellan direkt och indirekt immunofluorescens är att den direkta immunofluorescensen använder en enda antikropp som arbetar mot målet av intresse medan den indirekta immunofluorescensen använder två antikroppar för att märka målet av intresse.
Immunofluorescens eller cellavbildning är en teknik som används för att märka ett specifikt målantigen med en fluorofor. Här är fluoroforen en fluorescerande kemisk förening som kan återutsända ljus vid ljusexcitation. När en fluorofor binder till målantigenet tillåter den detektering av målmolekylen i provet. För att beskriva det ytterligare, när ett antigen binder till en specifik antikropp, kan det konjugeras med fluoroforer. Därför är det lätt att detektera närvaron av målantigenet i provet när man observerar under fluorescensmikroskopet.
Dessutom finns det två typer av immunfluorescens; direkt och indirekt immunfluorescens. Skillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens ligger främst i antalet använda antikroppar och fluoroforkonjugationen. Det vill säga, vid direkt immunofluorescens konjugerar fluoroforen direkt till den primära antikroppen medan vid indirekt immunfluorescens konjugerar fluoroforen med den sekundära antikroppen.
Vad är direkt immunfluorescens?
Immunofluorescens använder antikroppar för att detektera specifika målantigener. Direkt immunfluorescens är en av de två typerna av immunfluorescens. I direkt immunfluorescens involverar en enda antikropp (primär antikropp) och fluoroforen konjugerar direkt med den primära antikroppen. Vid bindning av antikroppen med målantigenet avger fluorofor fluorescens som kan detekteras med ett fluorescensmikroskop.
Figur 01: Direkt immunfluorescens
Direkt immunofluorescens är dock en dyr metod eftersom de primära konjugerade antikropparna är dyra jämfört med de sekundära antikropparna. Ändå innebär det inte ett extra steg, alltså en kortare teknik. Vidare reduceras icke-specifika bindningar i direkt immunfluorescens. Följaktligen är arternas korsreaktivitet låg. Men vid detektion är känsligheten för den direkta immunofluorescensen svag i jämförelse med den indirekta immunofluorescensen.
Vad är indirekt immunfluorescens?
Indirekt immunofluorescens är den andra typen av immunofluorescens som involverar två typer av antikroppar såsom primära och sekundära antikroppar i märkningen av målantigenet. I denna metod konjugerar fluoroforen med den sekundära antikroppen. Därför innebär denna teknik ett ytterligare steg.
Figur 02: Immunfluorescens
Känsligheten är dock hög i den här metoden eftersom flera fluoroforer kan konjugeras till sekundära antikroppar och det gör upptäckten enklare. Vidare är indirekt immunofluorescens billigare på grund av det faktum att konjugeringen av sekundära antikroppar är billigare och enklare. Jämfört med den direkta immunofluorescensen är arternas korsreaktivitet hög i den indirekta metoden.
Vilka är likheterna mellan direkt och indirekt immunfluorescens?
- De är två typer av immunfluorescensteknik.
- Primära antikroppar och fluorofor involverar båda metoderna.
- Antigen-antikroppsreaktionen inträffar också i båda metoderna.
- Dessutom använder både direkt och indirekt immunfluorescens ett fluorescensmikroskop för att detektera antigen.
Vad är skillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens?
Immunofluorescens kan vara direkt eller indirekt baserat på fluoroforkonjugationen med de använda antikropparna. Vid direkt immunfluorescens konjugerar fluoroforen med den primära antikroppen, som är den enda antikroppen som involverar denna teknik. I motsats till det, vid indirekt immunfluorescens, konjugerar fluoroforen med den sekundära antikroppen, som är en av de två typer av antikroppar som är involverade i tekniken. Därför är huvudskillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens antikroppstypen som konjugerar med fluoroforen.
Följande infografik ger en sida vid sida jämförelse av skillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens.
Sammanfattning – Direkt vs Indirekt immunfluorescens
Immunofluorescens är en teknik som används för att detektera närvaron av specifika antigener i ett prov. Denna teknik använder specifika antikroppar. Därför konjugerar antikropparna i detta med fluoroforer för att detektera dem med hjälp av ett fluorescerande mikroskop. Dessutom finns det två typer av immunfluorescens, nämligen direkt och indirekt immunfluorescens. Direkt immunfluorescens involverar en enda antikropp och fluorofor direkt konjugerad till denna antikropp. Indirekt immunfluorescens involverar två antikroppar; primär och sekundär och fluorofor konjugerad till den sekundära antikroppen. Eftersom flera sekundära antikroppar kan binda till en primär antikropp och flera fluoroforer kan konjugera med sekundära antikroppar, är indirekt immunfluorescens en mer känslig metod än den direkta metoden. Dessutom är den indirekta metoden billigare än den direkta metoden. Detta är alltså skillnaden mellan direkt och indirekt immunfluorescens.
