nyckelskillnad – DNA vs RNA-extraktion
Studien av DNA och RNA är viktiga aspekter för att förstå de grundläggande begreppen molekylärbiologi, bioteknik och genetik. Extraktion av rena DNA- och RNA-prover är nödvändiga för att utföra experimentella procedurer under dessa studier. Den viktigaste skillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion är att DNA-extraktionsprocessen renar DNA medan RNA-extraktion renar RNA. DNA-extraktionsprocessen har tre olika steg: cellys och katabolism av membranlipider och proteiner, klumpning av kataboliter genom koncentrerad s altlösning och utfällning av DNA med etanol. Trestegsproceduren kan bestå av två valfria steg. RNA-reningsprocessen består av fyra olika steg: tillsats av guanidiumtiocyanat för cellys, proteindenaturering inklusive ribonukleaser, separation av RNA genom tillsats av kloroform och fenol och tvättning av fällningen med etanol.
Vad är DNA-extraktion?
DNA-extraktion är en fysikalisk och kemisk process som används för att rena DNA från ett prov. DNA-extraktion är en viktig aspekt i samband med molekylärbiologi och krimin altekniska vetenskaper. Processen består av tre grundläggande steg. Inledningsvis bör cellerna av intresse erhållas. Därefter underlättas celllys för att bryta cellmembranet, vilket öppnar upp cellen och exponerar cytoplasman tillsammans med DNA. Ytaktiva ämnen eller andra detergenter kan användas för att lysera lipiderna från cellmembranet medan de närvarande proteinerna kataboliseras av proteaser. Detta är ett valfritt steg. När cellen väl har lyserats, underlättas klumpning av de kataboliserade molekylerna av koncentrerade s altlösningar. Det följs av centrifugering av lösningen som separerar skräpklumparna från DNA. I detta skede blandas det differentierade DNA:t med de reagenser och s alter som används under cellcykeln.
Figur 01: DNA-extraktion
Följande steg kan användas för att rena det ytterligare. En metod är etanolfällning, som går ut på att blanda iskall etanol med det separerade DNA-provet. DNA är olösligt i alkohol och producerar därigenom en pellet på grund av aggregationen av DNA-molekyler. Natriumacetat tillsätts i denna process för att öka graden av utfällning genom att öka jonstyrkan. Förutom etanolfällningsprocessen kan fenol-kloroformextraktionsprocess också induceras för detta. I denna metod denaturerar fenol de proteiner som finns i provet. När de väl har centrifugerats kommer denaturerade proteiner att förbli i den organiska fasen medan DNA-molekylerna som blandas med kloroform kommer att finnas i vattenfasen. Kloroform tar bort fenolrester. När extraktionen är klar hålls DNA upplöst i TE-buffert eller ultrarent vatten.
Vad är RNA-extraktion?
RNA-rening är en process genom vilken RNA renas från ett biologiskt prov. På grund av närvaron av ribonukleas i celler och vävnader är denna process komplicerad. Ribonukleasenzym har förmågan att bryta ned RNA snabbt. Ribonukleasernas kemiska natur är extremt stabil och det är svårt att inaktivera dem. Neutralisering av ribonukleaserna är ett alternativ. Eftersom detta enzym är allestädes närvarande i celler och vävnader, utvecklas speciella tekniker för RNA-extraktion. Av de många metoderna är den vanliga metoden Guanidiniumtiocynat-fenol-kloroformextraktion.
Figur 02: RNA-extraktion
Extraktionsmetoden för guanidiniumtiocynat-fenol-kloroform beror på centrifugering och fasseparation. Blandningen som ska centrifugeras består av vattenprovet och en vattenmättad lösning som består av fenol och kloroform. När den väl har centrifugerats består lösningen av en övre vattenfas och en undre organisk fas under neutrala pH-förhållanden (pH 7-8). RNA är närvarande i vattenfasen. Den organiska fasen består vanligtvis av proteiner lösta i fenol och lipider lösta i kloroform. Ett kaotropiskt medel (en molekyl som har förmågan att bryta vätebindningarna mellan vattenmolekyler) tillsätts; detta är känt som guanidiniumtiocyanat. Detta medel har förmågan att denaturera proteiner som inkluderar ribonukleaser som kan bryta ner RNA och är involverat i cellys. Det separerar också rRNA från ribosomala proteiner. Det sista steget av RNA-rening är att tvätta utfällningen av vattenfasen med etanol. RNA kunde också renas med flytande kväve.
Vilka är likheterna mellan DNA- och RNA-extraktion?
- Båda extraktionsprocesserna använder skadliga kemikalier som fenol och kloroform.
- Centrifugering är en viktig teknik för båda processerna.
- Etanol används för att tvätta fällningen och för att erhålla renat DNA eller RNA.
Vad är skillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion?
DNA vs RNA-extraktion |
|
| DNA-extraktion är en process som extraherar DNA från en organism eller ett prov. | RNA-extraktion är en process som extraherar RNA från ett prov. |
| Step | |
| DNA-extraktionsprocessen består av tre olika steg med två valfria steg. | RNA-extraktionsprocessen består av fyra olika steg. |
| Reagens | |
| Tyaktiva ämnen, proteaser (valfritt), alkohol, kloroform, fenol, natriumacetat används för DNA-extraktion. | Guanidiumtiocyanat, kloroform, fenol, etanol används för RNA-extraktion. |
Sammanfattning – DNA vs RNA-extraktion
DNA- och RNA-extraktion är viktiga aspekter av de experimentella procedurerna för studier av molekylärbiologi, genetik och bioteknik. Båda processerna involverar liknande reagens, men RNA-extraktion använder ett speciellt reagens som kallas guanidiumtiocyanat som minskar aktiviteten hos ribonukleaser. Detta är huvudskillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion.
Ladda ner PDF-version av DNA vs RNA-extraktion
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion
