nyckelskillnad – direkt vs indirekt ELISA
En enzymkopplad immunanalys (ELISA), även känd som enzymimmunanalys, är ett serologiskt test som upptäcker antikroppar i blodet. Det används som ett diagnostiskt verktyg för att ta reda på om patienten har exponerats för en viss typ av virus eller annat smittämne (antigen) och om kroppen har producerat antikroppar mot infektionen. ELISA kan också identifiera tidigare och nuvarande infektioner. Därför används ELISA ofta som ett förscreeningstest av läkarna innan djupgående analys av sjukdomar. Detta test kan utföras i laboratoriet genom att ta ett blodprov från patienten. Det finns två typer av ELISA-test: direkt ELISA och indirekt ELISA. Den viktigaste skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA är att indirekt ELISA är känsligare och kräver tillägg av en sekundär antikropp medan direkt ELISA är mindre känslig och bara använder en primär antikropp.
Vad är Direct ELISA?
ELISA är ett sjukdomsdiagnostiskt test som utförs för att identifiera förekomsten av särskilda antigener eller antikroppar i blodet. Det görs som en tallrikanalys. Den använder antikroppar kopplade till lätt analyserade enzymer. Antigeners närvaro i serumprovet binder till specifika antikroppar kopplade till enzymer. I det sista steget tillsätts ett specifikt substrat för att reagera med enzymet. Enzymet omvandlar substratet till en färgad eller signalproducerande produkt. Färgförändringen i det kemiska substratet avslöjar närvaron av en viss antikropp i serumprovet. Direkt ELISA-test använder endast en primär antikropp kopplad till enzymet. När det binds till antigenet ändrar det snabbt färgen, vilket indikerar närvaron av smittämnet i blodet. Signalernas intensitet är dock svagare vid direkt ELISA eftersom epitoperna är begränsade till bindning av antigenerna. Därför är direkt ELISA mindre känslig jämfört med indirekt ELISA.
Figur 01: Direkt ELISA-test
Vad är indirekt ELISA?
ELISA kan utföras med två typer av antikroppar, nämligen; primär antikropp och sekundär antikropp. Indirekt ELISA-verktyg använder båda typerna av antikroppar för att förstärka signalerna för bättre detektion. Indirekt ELISA-teknik utförs enligt följande.
- Plåtar inkuberas med antigener och tvättas för att blockera ospecifik bindning.
- Sedan tillsätts primära antikroppar och tvättas.
- Enzymkopplad sekundär antikropp tillsätts och tvättas.
- Ett substrat tillsätts och får reagera med enzymer.
- Signaler detekteras och närvaron eller frånvaron av det specifika antigenet i provet identifieras.
I indirekt ELISA-test kan flera sekundära antikroppar binda till en enda primär antikropp. Sekundära antikroppar är kopplade till enzymer som är lätta att analysera. Därför kan en bindning ge en stark signal på grund av mer än en interaktion. Därför är indirekt ELISA känsligare än direkt ELISA. Indirekt ELISA kan dock ge ospecifika signaler på grund av korsreaktioner av de sekundära antikropparna.
Figur 02: Indirekt ELISA-test
Vad är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA?
Direkt vs Indirekt ELISA |
|
| Direkt ELISA är mindre känsligt jämfört med indirekt ELISA. | Indirekt ELISA är känsligare. |
| Time Taket | |
| Direkt ELISA-test är en snabb process. | Indirekt ELISA är tidskrävande. |
| Användning av antikroppar | |
| Endast en typ av antikroppar (primära antikroppar) används i direkt ELISA. | Primära och sekundära antikroppar används för indirekt ELISA. |
| Link with Enzymes | |
| Primära antikroppar är kopplade till enzymer. | Sekundära antikroppar är kopplade till enzymer. |
| Cross-Reactivity of Second Antibodies | |
| Direct ELISA eliminerar korsreaktiviteten hos andra antikroppar. | Indirekt ELISA påverkas av korsreaktivitet av andra antikroppar. |
| Signals | |
| Signalerna är svaga jämfört med indirekt ELISA. | Signaler förstärks i indirekt ELISA. Därför är det lätt att upptäcka. |
Sammanfattning – Direkt vs Indirekt ELISA
ELISA är en biokemisk teknik som främst används inom immunologi för att detektera närvaron av en antikropp eller ett antigen i ett blodprov från en patient. Det kan utföras via två processer som kallas direkt eller indirekt ELISA. Direkt ELISA-test använder endast primära antikroppar för att detektera antigenet medan indirekt ELISA använder både primära och sekundära antikroppar. I direkt ELISA märks primära antikroppar medan i indirekt ELISA märks sekundära antikroppar. Detta är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA.
