Nyckelskillnaden mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sönder är att radioaktiva sönder är enkelsträngade DNA- eller RNA-sekvenser som är märkta med radioaktiva isotoper medan icke-radioaktiva sönder är enkelsträngade DNA- eller RNA-sekvenser som är märkta med en kemisk etikett eller en fluorescerande tagg.
Nukleinsyrahybridisering är en viktig teknik inom molekylärbiologi, särskilt vid mikrobiell diagnostik. Det hjälper till att identifiera eller detektera en viss nukleinsyrasekvens. I denna teknik fixeras nukleinsyror till en fast yta och hybridiseras med en sond. En sond är ett fragment av DNA eller RNA som är komplementärt till en sekvens av intresse. Om målsekvensen finns i provet kommer sonden att hybridisera med den och göra den detekterbar. Det finns två typer av sonder som radioaktiva och icke-radioaktiva sonder. Därför kan vi märka sonderna med en radioaktiv etikett eller en fluorescerande etikett.
Vad är radioaktiva sonder?
Radioaktiva prober är enkelsträngade DNA- eller RNA-fragment med en radioaktiv etikett. Radioisotoper används vid framställning av radioaktiva sonder. Radioisotoper 32P, 33P och 35S används vanligtvis vid märkning av sonder. Dessutom används radioisotoper 3H och 1251 också i mindre utsträckning vid märkning av sonder. Men de används för specifika tillämpningar. Bland olika radioisotoper är 32P den vanligaste isotopen vid märkning av radioaktiva sonder.
Radioaktiva sonder ger en högre grad av tillförlitlighet och specificitet. Därför ger de maximal känslighet och tillåter noggrann kvantifiering av målsekvenser. Det finns dock flera nackdelar förknippade med radioaktiva sonder. De har korta halveringstider. Dessutom är de farliga och produktion, användning och kassering är problematiska vid hantering. Dessutom är förberedelse av radioaktiva sond en kostsam process. På grund av säkerhetsproblem och kostnader används därför inte radioaktiva sonder som icke-radioaktiva sonder nuförtiden.
Vad är icke-radioaktiva sonder?
Icke-radioaktiva sonder är den andra typen av sonder som är kemiskt märkta. Digoxigenin är en icke-radioaktiv sond, som är en antikroppsbaserad markör. Digoxigeninsonder är specifika och känsliga. Biotin är en annan märkning som används i icke-radioaktiva probberedningar. Biotin/Streptavidin och Digoxigenin/Antikropp-detektionssystem är de vanligast använda icke-radioaktiva sonderna vid hybridisering. Dessutom är pepparrotsperoxidassystemet ett annat icke-radioaktivt sondsystem. När väl dessa icke-radioaktiva sönder har hybridiserats med målsekvenserna kan de detekteras via autoradiografi eller andra avbildningstekniker.
Figur 01: Hybridisering med icke-radioaktiva sonder
Icke-radioaktiva prober används oftare i nukleinsyrahybridisering än radioaktiva prober. Detta beror på att icke-radioaktiva sonder inte är förknippade med farliga material. Vidare kräver icke-radioaktiva detektionsmetoder kortare exponeringstider för att detektera hybridiseringssignalen. Emellertid är stegen involverade i DNA-hybridisering med icke-radioaktiva prober vanligtvis tråkiga och tidskrävande. Dessutom är kommersiellt tillgängliga lösningar dyra.
Vilka är likheterna mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder?
- Radioaktiva och icke-radioaktiva prober är två typer av prober som används vid nukleinsyrahybridisering.
- De underlättar detekteringen av målsekvenser i provet.
- Båda typerna av sonder är lika känsliga och specifika.
Vad är skillnaden mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder?
Radioaktiva sönder är enkelsträngade DNA- eller RNA-sekvenser märkta med radioaktiva isotoper, medan icke-radioaktiva sönder är enkelsträngade DNA- eller RNA-sekvenser märkta med en kemisk etikett. Så detta är nyckelskillnaden mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder. Radioaktiva isotoper är också farliga. Därför är radioaktiva sonder avsevärt farliga, medan icke-radioaktiva sonder inte är farliga.
Dessutom är en annan skillnad mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder deras nackdelar. Korta halveringstider och de faror som är förknippade med deras produktion, användning och bortskaffande är nackdelarna med att använda radioaktiva sonder. Å andra sidan är stegen involverade i DNA-hybridisering med icke-radioaktiva prober vanligtvis tråkiga och tidskrävande.
Infografiken nedan visar fler jämförelser relaterade till skillnaden mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder.
Sammanfattning – Radioaktiva vs icke-radioaktiva sonder
En sond är ett fragment av DNA eller RNA som innehåller en nukleotidsekvens som är komplementär till sekvensen av intresse. För att detektera målsekvensen kan proberna märkas radioaktivt, fluorescerande eller kemiskt. Prober binder med komplementära sekvenser i provet. Radioaktiva prober är märkta med radioaktiva isotoper medan icke-radioaktiva prober är märkta med biotin, digoxigenin eller pepparrotsperoxidas. Detta är alltså den viktigaste skillnaden mellan radioaktiva och icke-radioaktiva sonder.
