Den viktigaste skillnaden mellan Elisa och Elispot är att Elisa är en enzymkopplad immunosorbentanalys som bestämmer den totala koncentrationen av utsöndrade signalproteiner, medan Elispot är en enzymkopplad immunosorbentanalys som detekterar enskilda cytokinutsöndrande celler.
Elisa och Elispot är två enzymkopplade immunosorbentanalyser som ofta används inom medicin, växtpatologi, bioteknik och olika läkemedelsindustrier. I dessa tekniker detekteras en proteinanalyt av en antikropp riktad mot den. Elisa är den mest populära enzymkopplade immunosorbentanalysen som används i laboratorier. Å andra sidan är Elispot en enzymkopplad immunosorbentanalys som inte används istället för Elisa utan snarare används som komplement till Elisa i laboratorier.
Vad är Elisa Assay?
Elisa är en enzymkopplad immunosorbentanalys som bestämmer den totala koncentrationen av utsöndrade signalproteiner. Det är en mycket använd analytisk biokemianalys som först beskrevs av Engvall och Perlmann 1971. Denna teknik använder en enzymimmunanalys av fastfastyp för att detektera närvaron av ett specifikt protein i ett flytande prov med hjälp av antikroppar riktade mot detta specifika protein. Denna analys är ett vanligt använt diagnostiskt verktyg inom medicin, växtpatologi och bioteknik.
Mekanism för ELISA-test
I större delen av ELISA-testet immobiliseras en okänd mängd antigen på ett fast underlag (mikroliterplatta) i början. Sedan appliceras den matchande primära antikroppen över den fasta stödytan. Denna antikropp bildar ett komplex med antigenet (antigen-antikroppskomplex). Den antigenbundna primära antikroppen kan detekteras av en sekundär antikropp som är kopplad till ett enzym genom biokonjugering. I det sista steget av Elisa-testet tillsätts ett ämne som innehåller enzymets substrat. Om det finns en korrekt bindning av en primär antikropp till antigenet produceras en detekterbar färgförändring av substratet. I slutändan kvantifierar detta antigenet i provet.
Figur 01: Olika typer av Elisa
Dessutom finns det olika synsätt på Elisa, som direkt Elisa och indirekt Elisa. För närvarande används olika Elisa-tester för att upptäcka mänskliga patogener som Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, hepatit B-virus, hepatit C-virus, enterotoxinproducerande E.coli, HIV och SARS-CoV-2.
Vad är Elispot Assay?
Elispot är en enzymkopplad immunosorbentanalys som detekterar enskilda cytokinutsöndrande celler. Cecil Czerkinsky beskrev ELISpot första gången 1983. Det är en typ av analys som fokuserar på att kvantitativt mäta frekvensen av cytokinutsöndring för en enskild cell. Det klassificeras också som en teknik som använder antikroppar för att detektera en biologisk eller kemisk proteinanalyt. Fluorospot-analysen är en variant av Elispot-analysen, som använder fluorescens för att analysera flera analyter (mer utsöndrade proteiner).
Mechanism of Elispot Test
I den här mekanismen tillsätts cytokinspecifika monoklonala antikroppar initi alt till brunnarna på mikroliterplattor. Sedan läggs de önskade cellerna som observeras till brunnarna. Senare inkuberas cellerna. Under cellinkubationen tillåts cellerna reagera på alla stimuli och utsöndra cytokin. Cytokinerna som har utsöndrats av de inkuberade cellerna kommer att fästa till antikropparna eftersom cellerna är omgivna av cytokinspecifika monoklonala antikroppar.
Figur 02: Elispot Assay
För att detektera dessa cytokinspecifika monoklonala antikroppar läggs biotinylerade specifika detektionsantikroppar till brunnen. Biotinylerade specifika detektionsantikroppar fångar de cytokinspecifika monoklonala antikropparna i brunnarna. Dessutom tillsätts streptavidin-enzymkonjugat till brunnarna för att binda till detektionsantikropparna. I det sista steget tillsätts specifika substrat till brunnarna. Reaktionerna av enzymkonjugat och substrat producerar distinkta fläckar i brunnarna. Dessa distinkta fläckar läses på en automatiserad ELISpot-läsare. I slutändan kommer detta att ytterligare beräkna frekvensen av cytokinutsöndring.
Vilka är likheterna mellan Elisa och Elispot?
- De är båda enzymkopplade immunosorbentanalyser.
- Båda analyserna detekterar specifika proteinanalyter.
- Dessa analyser använder specifika antikroppar för att identifiera proteinanalyterna.
- Båda analyserna använder enzymer och substrat.
- De används som ett diagnostiskt verktyg i medicinska laboratorier.
Vad är skillnaden mellan Elisa och Elispot?
Elisa är en enzymkopplad immunosorbentanalys som bestämmer den totala koncentrationen av utsöndrade signalproteiner. Å andra sidan är Elispot en enzymkopplad immunosorbentanalys som mäter individuella cytokinutsöndrande celler. Så detta är den viktigaste skillnaden mellan Elisa och Elispot. Dessutom, i Elisa-testet, immobiliseras antigenet först på mikroliterbrunnarna. Däremot immobiliseras antikroppen i Elispot-testet först på mikroliterbrunnarna. Detta är alltså ytterligare en skillnad mellan Elisa och Elispot.
Infografiken nedan presenterar en detaljerad analys av skillnaden mellan Elisa och Elispot i tabellform.
Sammanfattning – Elisa vs Elispot
Elisa och Elispot är två enzymkopplade immunosorbentanalyser som ofta används inom medicin, växtpatologi, bioteknik och olika läkemedelsindustrier. Elisa detekterar närvaron av en ligand (protein) i ett vätskeprov med hjälp av antikroppar riktade mot liganden som ska mätas. Elispot-analys är en allmänt använd metod för att övervaka immunsvar. Den detekterar individuella cytokinutsöndrande celler med hjälp av antikroppar. Det är både en immunanalys och en bioanalysteknik. Detta är alltså sammanfattningen av skillnaden mellan Elisa och Elispot.
