Den viktigaste skillnaden mellan BCA- och Bradford-analysen är att BCA-analysen är tidskrävande och mindre exakt, medan Bradford-analysen är snabb och exakt.
BCA och Bradford-analys är två analysmetoder för bestämning av proteinkoncentration. Dessa två analyser har olika analysprinciper och skillnader i deras noggrannhet.
Vad är BCA-analys?
BCA-analys eller bicinchoninsyra-analys är en biokemisk analys som är användbar för att bestämma den totala koncentrationen av protein i en lösning. Denna metod är också uppkallad som Smith-analys efter dess uppfinnare, Paul K. Smith. Denna analysmetod visar likheter med Lowry-proteinanalys, Bradford-proteinanalys eller biuretreagens. Vi kan observera den totala proteinkoncentrationen i ett givet prov genom en färgförändring av provlösningen, som går från grönt till lila. Denna färgförändring sker i proportion till proteinh alten. Därefter kan vi använda en kolorimetrisk teknik för att analysera färgintensiteten och proteinh alten i provet.
BCA-metod för proteinuppskattning
När man överväger mekanismen för BCA-analys, innehåller den typiska BCA-lösningen en mycket alkalisk lösning med ett pH på nästan cirka 11,25, och ingredienserna i denna lösning inkluderar bicinchoninsyra, natriumkarbonat, natriumbikarbonat, natriumtartrat och koppar(II)sulfatpentahydrat. Denna analys beror främst på två kemiska reaktioner: reduktionen av koppar(II) till koppar(I) genom peptidbindningarna i protein och kelering av två molekyler av bicinchoninsyra med koppar(I)-jon, vilket resulterar i ett lilafärgat komplex som kan absorbera ljus vid 562 nm våglängd. I den första reaktionen är mängden koppar(II) reducerad av peptidbindningar proportionell mot mängden protein i provet.
Vad är Bradford Assay?
Bradford-analys är en spektroskopisk analysmetod användbar för att mäta koncentrationen av protein i en lösning. Denna metod utvecklades av Marion M. Bradford 1976, och det är en jämförelsevis snabb och exakt metod.
Färgreaktion av protein och Bradford-reagens
Vi kan använda den här metoden för att bestämma koncentrationen av proteinmängden i ett prov. Den kemiska reaktionen som äger rum i provet under denna analys är enbart beroende av aminosyrasammansättningen av proteinet i provet.
Bradford Method of Protein Estimation
När man överväger metoden för denna analys, är det en kolorimetrisk proteinanalys som är baserad på absorbansförskjutningen av färgämnet Coomassie Brilliant Blue G-250. I allmänhet finns detta färgämne i tre former som anjonisk (blå) form, neutral (grön) form och katjonisk (röd) form. Därför, under sura förhållanden, ändrar färgen sin färg från rött till blått. Detta beror på bindningen av proteinet med färgämnet. Däremot, om det inte finns något protein att binda med färgämnet, uppträder inte färgförändringen, lösningen får en rödbrun färg. Detta färgämne kan bilda ett starkt, icke-kovalent komplex med karboxylgruppen i proteinet genom Van der Waal-krafter och elektrostatiska attraktioner.
Vad är skillnaden mellan BCA och Bradford Assay?
BCA och Bradford-analys är två analysmetoder för bestämning av proteinkoncentration. Dessa två analyser har olika analysprinciper och skillnader i deras noggrannhet. Den viktigaste skillnaden mellan BCA och Bradford-analysen är att BCA-analysen är tidskrävande och mindre exakt, medan Bradford-analysen är snabb och exakt.
Följande infografik sammanfattar skillnaderna mellan BCA och Bradford-analys i tabellform.
Sammanfattning – BCA vs Bradford Assay
BCA-analys eller bicinchoninsyra-analys är en biokemisk analys som är användbar för att bestämma den totala koncentrationen av protein i en lösning. Bradford-analys är en spektroskopisk analysmetod användbar för att mäta koncentrationen av protein i en lösning. Den viktigaste skillnaden mellan BCA och Bradford-analysen är att BCA är tidskrävande och mindre exakt, medan Bradford-analysen är snabb och exakt.
