Nyckelskillnaden mellan mikrokärn- och kometanalys är att mikrokärnanalys är viktig för att kontrollera kromosomskador som en konsekvens av mutagenexponering, medan kometanalys är viktig för att upptäcka primär DNA-skada i enskilda celler.
Genotoxicitetsanalyser hjälper till att bedöma möjligheterna till mutationer och kromosomavvikelser. Genotoxiner inkluderar kemiska ämnen och strålning. Cancerframkallande ämnen, mutagener och teratogener är huvudkategorierna av genotoxiner. De orsakar olika skador såsom punktmutationer, deletioner, enkel- och dubbelsträngsbrott, kromosomavvikelser, mikrokärnor, DNA-reparation och cellcykelinteraktioner. Sådana tillstånd kan leda till en mängd olika sjukdomar, och genotoxicitetsanalyser förhindrar potentiell skada från dessa tillstånd. Mikrokärnanalys och kometanalys är två tekniker under genotoxicitetsanalyser.
Vad är Micronucleus Assay?
Micronucleus assay är en analys för att bedöma kromosomskador som en konsekvens av mutagen exponering. Det är viktigt vid screening av kemikalier som orsakar spindelbildning och mikrokärnor. En mikrokärnanalys ger information om kemikaliernas stabilitet när de stör kromosomstruktur och funktion. Många cancerframkallande ämnen testar positivt i mikronukleusanalyser. Analysprocessen involverar en kemisk behandling och mätning av frekvensen av mikronukleära celler. Om det finns en onormal ökning av antalet mikrokärnor, drar den slutsatsen att kemikalien inducerar kromosomskada.
En mikrokärnanalys utförs vanligtvis på aktivt delande celler. Därför är erytrocyter och benmärgsstamceller som produceras genom celldelningar idealiska kandidater för sådana analyser. De upplever en konstant och snabb omsättning. Eftersom erytrocyter inte har några verkliga kärnor, gör det mikrokärnförsedda celler mer synliga i slutet av analysen.
Figur 01: Mikronukleusanalysobservation
Micronucleus-analyser är ekonomiska, snabbare, bekväma och kräver färre färdigheter att utföra. De återspeglar kromosomavvikelser snabbt på ett tillförlitligt sätt och är extremt användbara för att snabbt bedöma kromosomskador. En speciell och mångsidig typ av mikronukleusanalys är cytokinesis block micronucleus cytome (CBMNcyt) assay. Det är den bästa analysen för att mäta kromosomskada och instabilitet i celler. Det största problemet med att använda mikrokärnanalys är dock att den inte kan fastställa olika typer av kromosomavvikelser, och analysen har en inverkan på mitotisk hastighet och andel celldöd, vilket gör att resultaten förändras.
Vad är Comet Assay?
Comet-analys, som också är känd som singel-elektroforesanalys, är en enkel och känslig teknik för att upptäcka DNA-skador. Den mäter DNA-brotten i eukaryota celler och är en standardteknik för bioövervakning och genotoxicitetstestning.
Kometanalysen är involverad i inkapsling av celler i agarossuspensioner med låg smältpunkt, lys av celler under neutrala eller alkaliska förhållanden och elektrofores av suspenderade lyserade celler. Under inkapslingsprocessen suspenderas cellerna i smält agaros med låg smältpunkt, och agarosen bildar en matris av kolhydratfibrer för att förankra dem på plats. Agaros är osmotiskt neutral; därför gör det det möjligt för lösningarna att penetrera genom gelén och påverka cellerna utan att störa och förskjuta dem. Lyslösningen är en högkoncentrerad vattenh altig s altlösning och ett rengöringsmedel. Detta s alt stör proteiner och bindningsmönstren i cellen samtidigt som det stör RNA-innehållet i cellen. Cellerna förstör, och alla proteiner, RNA, cytoplasmatiska och nukleoplasmatiska beståndsdelar, stör och diffunderar in i agarosmatrisen och lämnar DNA:t.
Figur 02: Comet Assay
Elektroforeslösningen är en alkalisk lösning där DNA:ts dubbelspiral denaturerar och nukleoiden blir enkelsträngad. Under denna process appliceras ett elektriskt fält för att analysera bilderna. Bildanalysen mäter den övergripande intensiteten av fluorescensen för DNA och nukleoid och jämför de två. Den övergripande strukturen liknar en komet med ett cirkulärt huvud som motsvarar det återstående oskadade DNA:t och en svans för det skadade DNA:t. Ju ljusare och längre svansen är på grund av starkare signaler, desto högre är skadan.
Vilka är likheterna mellan Micronucleus och Comet Assay?
- Micronucleus och kometanalysen är ekonomiska, snabbare, bekväma och kräver färre färdigheter.
- De utförs huvudsakligen på DNA.
- Båda analyserna hjälper till att bedöma mutationer och kromosomavvikelser.
- Dessutom använder båda teknikerna kemikalier för att utföra proceduren.
Vad är skillnaden mellan Micronucleus och Comet Assay?
Mikronukleusanalysen är viktig för att kontrollera kromosomskador som en konsekvens av mutagenexponering, medan kometanalysen är viktig för att upptäcka primär DNA-skada i enskilda celler. Detta är alltså nyckelskillnaden mellan mikrokärn- och kometanalys. Mikronukleusanalysen är också väl etablerad för att detektera klastogenicitet och aneugenicitet. Kometanalysen används som ett genotoxicitetstest för att upptäcka primär DNA-skada i celler. Dessutom ger en mikronukleusanalys information om kemikaliernas stabilitet, medan en kometanalys är en encellsgelelektrofores.
Infografiken nedan visar skillnaderna mellan mikrokärn- och kometanalys i tabellform för jämförelse sida vid sida.
Sammanfattning – Micronucleus vs Comet Assay
Genotoxicitetsanalyser hjälper till att bedöma möjligheterna till mutationer och kromosomavvikelser. Mikronukleusanalys och kometanalys är två tekniker under genotoxicitetsanalyser. Mikrokärnanalys bedömer kromosomskador som en konsekvens av mutagen exponering. Comet assay är en enkel och känslig teknik för att upptäcka DNA-skador. Så detta är nyckelskillnaden mellan mikrokärn- och kometanalys. Mikrokärnanalys är viktig vid screening för kemikalier som orsakar spindelbildning och mikrokärnor. Comet-analys är involverad i inkapsling av celler i agarossuspensioner med låg smältpunkt, lys av celler i neutrala eller alkaliska förhållanden och elektrofores av suspenderade lyserade celler.
