Den viktigaste skillnaden mellan BL21 och DH5 Alpha är att BL21 är en proteasbrist, genetiskt modifierad kompetent E. coli-cell som främst används för proteinuttryck, medan DH5 Alpha är en genetiskt modifierad kompetent E. coli-cell med recA1-mutation som främst används för plasmidtransformation.
E. coli är en av de kända organismerna för rekombinant proteinproduktion. Det har blivit den mest populära uttrycksplattformen genom åren. Den används också som cellfabrik. BL21 och DH5 Alpha är två genetiskt modifierade E. coli-celler som för närvarande används för proteinuttryck respektive plasmidtransformation.
Vad är BL21?
BL21 är en proteasbrist, genetiskt modifierad kompetent E.coli-cell som främst används för proteinuttryck. E. coli BL21 är en bakteriecell som härrör från B-stammen. Den har defekter av Lon-proteas och ompT yttre membranproteas. Det används vanligtvis för rekombinant proteinuttryck eftersom det norm alt ger stabilitet till uttryckta proteiner. BL21 är användbart för proteinuttryck med pCold I-IV DNA och pCold TF DNA. Men denna kompetenta E. coli-cell är inte avsedd för ett proteinexpressionssystem som använder T7-promotor såsom pET-system. Anledningen till detta är att BL21 inte uttrycker T7 RNA-polymeras. Dessutom rekommenderas det inte att använda för konstruktion eller beredning av plasmid eftersom den inte har recA-mutation.
Figur 01: BL21
BL21 beskrevs första gången av Studier 1986 efter olika modifieringar av B-linjen. BL21-celler har brist på LON-proteas, som bryter ned många främmande proteiner. Dessutom saknas en annan gen som kodar för det yttre membranproteaset (OmpT) vars funktion är att bryta ned extracellulära proteiner. En brist på dessa proteiner utlöser framgångsrik produktion av främmande protein i E. coli BL21-celler. Dessutom förhindrar hsdSB-mutation i dessa celler främmande DNA-metylering och störningar i BL21-cellerna.
Vad är DH5 Alpha?
DH5 Alpha är en genetiskt modifierad kompetent E. coli-cell med recA1-mutation som främst används för plasmidtransformation. DH5 Alpha E. coli-celler är genetiskt modifierade av den amerikanske biologen Douglas Hanahan för att maximera transformationens effektivitet. DH5 Alpha-cellen har tre distinkta mutationer: recA1, endA1 och lacZΔM15. recA1 är en enpunktsmutation som ersätter glycin 160 med och en asparaginsyrarest i recA-polypeptiden. Denna mutation inaktiverar aktiviteten hos rekombinaserna och inaktiverar homolog rekombination. endA1-mutation inaktiverar ett intracellulärt endonukleas som hindrar det från att bryta ned den infogade plasmiden.
Figur 02: DH5 Alpha
Dessutom möjliggör lacZΔM15-mutation blå-vit screening av transformerade celler. Dessa celler är kompetenta celler. De används ofta med kalciumkloridtransformation för att infoga den önskade plasmiden. Ny forskning har upptäckt att DH5 Alpha-cellen med Hanahan-metoden var den mest effektiva kompetenta cellen för plasmidtransformation.
Vilka är likheterna mellan BL21 och DH5 Alpha?
- BL21 och DH5 Alpha är två genetiskt modifierade E.coli
- Båda är kompetenta celler.
- De består av distinkta mutationer.
- Båda har ingen naturlig livsmiljö.
- Dessa används för laboratorieändamål såsom expressionsstudier och kloningsprocedurer.
Vad är skillnaden mellan BL21 och DH5 Alpha?
BL21 är en proteasdefekt genetiskt modifierad kompetent E. coli-cell som främst används för proteinuttryck. Å andra sidan är DH5 Alpha en genetiskt modifierad kompetent E. coli-cell med recA1-mutation som främst används för plasmidtransformation. Så detta är den viktigaste skillnaden mellan BL21 och DH5 Alpha. Dessutom har BL21 E. coli-cellen inte recA1-mutation, medan DH5 Alpha E. coli-cellen har recA1-mutation.
Följande infografik listar skillnaderna mellan BL21 och DH5 Alpha i tabellform.
Sammanfattning – BL21 vs DH5 Alpha
De icke-patogena stammarna av E. coli är genetiskt utvecklade av forskare för laboratorieexpressionsstudier och kloningsändamål. BL21 och DH5 Alpha är två genetiskt modifierade E. coli-celler. BL21 används främst för proteinuttrycksstudier. Å andra sidan används DH5 Alpha främst för plasmidtransformationsändamål. Detta är alltså sammanfattningen av skillnaden mellan BL21 och DH5 Alpha.
