nyckelskillnad – nitrocellulosa vs nylonmembran
Blotting är en viktig teknik för att detektera specifika sekvenser av DNA, RNA och proteiner från deras blandningar inom molekylärbiologi. Det görs med hjälp av ett membran som kallas blot. Det finns olika blottingtekniker såsom northern, southern och western blotting. Att välja ett lämpligt membran för blottingprocessen bör göras noggrant för att förhindra ospecifik bindning och felaktiga upptäckter. Nitrocellulosa, nylon och PVDF är vanliga membran i blottingtekniker. De har olika egenskaper. Den viktigaste skillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran är att nitrocellulosamembran har hög proteinimmobiliseringspotential medan nylonmembran har hög nukleinsyraimmobiliseringspotential. Båda typerna av membran används dock ofta i blottingtekniker.
Vad är en nitrocellulosamembran?
Nitrocellulosamembran är ett vanligt använt membranfilter i nukleinsyra- och proteinblotting-tekniker. Den har en hög proteinbindningspotential. Följaktligen används nitrocellulosamembran i stor utsträckning i western blotting-teknik. Nitrocellulosamembran är kompatibla med alla hybridiseringstekniker och uppvisar överlägsen bindningskapacitet utan störningar. Nitrocellulosamembran är naturligt hydrofila till sin natur. De gör hydrofil interaktion med molekyler och immobiliserar dem effektivt på membranet. Kommersiella nitrocellulosamembran finns i två porstorlekar: 0,45 och 0,2 µm.
Figur 01: Nitrocellulosamembran som används i western blotting
Vad är en nylonmembran?
Nylonmembran är en annan typ av kommersiellt membran som används i blottingtekniker. Den används alternativt med nitrocellulosamembran för Southern och Northern blotting. Nylonmembran är idealiska för southern blotting än nitrocellulosa på grund av deras höga affinitet för bindning med DNA. På grund av flera unika egenskaper hos nylonmembran använder forskare vanligtvis nylonmembran för sydlig och nordlig blotting istället för över nitrocellulosamembran. Nylonmembran rekommenderas också för strippning och reprobing, till skillnad från nitrocellulosa.
Figur 02: Nylonmembran som används för Southern blotting
Vad är skillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran?
Nitrocellulosa vs Nylonmembran |
|
| Nitrocellulosamembran är spröda. | Nylonmembran är mindre spröda. |
| Handling | |
| De är svåra att hantera. | De är lätta att hantera. |
| Reprobing | |
| Nitrocellulosamembran som inte stöds är svåra att undersöka. | Återprovning är lätt med nylonmembran. |
| Kompatibilitet med olika lagringsvillkor | |
| Nitrocellulosamembran har mindre styrka för att klara olika lagringsförhållanden. | Nylonmembran svarar mer robust på olika lagringsförhållanden. |
| Använd | |
| Förvätning krävs. | Förvätning krävs inte för nylonmembran. |
| Hydrophilic Nature | |
| Nitrocellulosamembran är hydrofila till sin natur men är mindre hydrofila än nylonmembran. | De är mycket hydrofila till sin natur. |
| Immobiliseringspotential | |
| Nitrocellulosamembran har mindre affinitet för nukleinsyror. Men den har en hög affinitet för proteiner. | Nylonmembran har en hög bindningspotential med nukleinsyror än nitrocellulosamembran. |
Sammanfattning – Nitrocellulosa vs Nylon Membrane
Nitrocellulosa- och nylonmembran är speciella ark som används i blottingteknik för att reproducera bandmönstret på gelén. De möjliggör möjligheten att detektera en specifik sekvens eller ett protein från blandningarna genom att immobilisera dem på membranet. När väl molekylerna har immobiliserats på membranet kan det användas som ett substrat för hybridiseringsanalys med märkta prober. Nitrocellulosamembran används vanligtvis för proteindetektion i western blotting-teknik på grund av dess höga bindningsaffinitet med proteiner. Nylonmembran används ofta för Southern och Northern blotting. Detta är skillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran.
