Key Difference – YAC vs M13 Phage Vector
DNA-kloning är en viktig process som möjliggör förökning av viktiga DNA-fragment av organismer. Det kräver sammanfogning av specifikt DNA med vektor-DNA för att skapa rekombinant DNA som omvandlas till värdorganismen. En vektor är en DNA-molekyl som beter sig som en bärare för att transportera främmande genetiskt material in i en annan cell eller organism. Den bör kunna replikera inuti värdorganismen och producera flera kopior av rekombinant DNA. Det finns olika typer av vektorer som används i DNA-kloning. Jäst artificiell kromosom (YAC) och M13 fagvektor är två typer bland dem. Den viktigaste skillnaden mellan YAC och M13 fagvektor är att YAC är en artificiell kromosom som replikerar i jästceller medan M13 fagvektor är ett enkelsträngat cirkulärt DNA från bakteriofag M13 som replikerar i E Coli-celler.
Vad är en YAC-vektor?
YAC är en artificiellt byggd kromosom som har förmågan att bära ett stort segment av främmande DNA och replikera i jästcellerna. Den har centromerer, telomerer och autonomt replikerande sekvenser som är nödvändiga för replikation och stabilitet. YAC bör också bära en eller flera selektiva markörer och restriktionsställen för att göra den till en effektiv kloningsvektor. Stora sekvenser från 1000 kb till 2000 kb kan infogas i YAC och överföras till jäst.
Figur 01: YAC Vector
Vad är M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 är ett virus som infekterar och replikerar i E Coli. Genomet av M13-bakteriofagen är litet i storlek, cirka 6,7 kb. Det är ett enkelsträngat, cirkulärt och positivt sinnes-DNA. Detta virus infekterar specifikt E Coli-bakterier genom F pilus. När den väl kommer in i ssDNA:t i bakterien, syntetiserar den dess komplementära sträng och blir till dsDNA eller den replikativa formen (RF) av M13. RF kan bete sig som en plasmid i värdorganismen. DsDNA:t replikerar inom E Coli och producerar ssDNA som bär nya fager. Dessa nya fager frisätts kontinuerligt från E Coli utan att döda värdcellen. Infektionen bromsar dock tillväxten av E Coli. dsDNA kan extraheras från bakterieceller och användas som vektorer i DNA-kloning. De är kända som M13 fagvektorer. De kan lätt manipuleras och användas på samma sätt som plasmidvektorer.
Den inneboende infektionsförmågan hos dessa M13-fager fungerar som en god kvalifikation för att användas som vektor vid genkloning. När M13 utvecklas till en vektor bör flera element inkorporeras i dess genom. De är, en gen för lac-repressorproteinet (lac I), den operatör-proximala regionen av lac Z-genen, en lac-promotor och ett multipelt kloningsställe (polylinker). När dsDNA från M13 används som vektorer kan det behandlas som en plasmidvektor. Användningen av ssDNA M13 har dock fördelar vid DNA-sekvensering och platsriktad mutagenes.
Eftersom M13-fagvektor har flera kloningsställen i lacZ-regionen, kan rekombinerade vektorer lätt identifieras genom blå/vit koloniscreening på agarplattor som innehåller IPTG och X-Gal. Blå plack producerade på plattorna innehåller inte de rekombinerade fagerna. Därför kan fager med inlägg väljas för kloningsändamål.
Figur 02: Bakteriofag M13
Vad är skillnaden mellan YAC och M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC är en genetiskt modifierad kromosom som har förmågan att bära ett stort segment av främmande DNA och replikera i jästcellerna. | M13 fagvektor är en viral vektor utvecklad av bakteriofag M13 som används för att infoga främmande DNA i E Coli. |
| Purpose | |
| YACs designades för att klona stora fragment av genomiskt DNA till jäst. | M13 fagvektorer används för att infoga främmande DNA i E Coli. |
| Infoga längd | |
| YAC kan innehålla genomiska inlägg i megabasstorlek (1000 kb – 2000 kb). | Storleken på inlägg är cirka 1 500 bps. |
| Construction | |
| YAC-DNA är svårt att rena intakt och kräver en hög koncentration för att generera YAC-vektorsystem. | Det sker via cyklisk fotosyntetisk elektronkedja. |
| Stabilitet | |
| YAC är instabil. | M13-fager kan enkelt extraheras. |
| Size | |
| Enzymer är större molekyler. | M13-fager är stabila än YAC. |
Sammanfattning – YAC vs M13 Phage Vector
YAC är ett artificiellt konstruerat vektorsystem som använder en specifik region av jästkromosomen för att infoga stora segment av genetiskt material i jästceller. M13 fagvektor är ett vektorsystem härlett från bakteriofag M13 som använder E coli som värdorganism. Detta är huvudskillnaden mellan YAC och M13 Phage Vector. Båda är lika användbara i rekombinant DNA-teknik och genkloning.
