Den viktigaste skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi är att vi kan använda affinitetskromatografi för att separera laddade eller oladdade komponenter i en blandning medan vi kan använda jonbyteskromatografi för att separera laddade komponenter i en blandning.
Kromatografi är en teknik som vi kan använda för att separera de önskade komponenterna i en blandning. Det finns olika typer som vätskekromatografi, gaskromatografi, etc. Affinitetskromatografi och jonbyteskromatografi är två underkategorier av vätskekromatografi. I dessa tekniker finns det också två faser. De är nämligen den stationära fasen och den mobila fasen. Syftet med dessa tekniker är att separera komponenterna, beroende på komponenternas bindning, i den mobila fasen på ytan av den stationära fasen.
Vad är affinitetskromatografi?
Affinitetskromatografi är en biokemisk teknik som vi använder för att separera komponenter i en blandning beroende på interaktionerna mellan dessa komponenter.
Interaktionerna som vi använder i det här fallet inkluderar följande:
- Antigen-antikroppsinteraktioner
- Enzym-substratinteraktioner
- Receptor-ligandinteraktioner
- Protein-nukleinsyrainteraktioner
I den här tekniken använder vi molekylernas molekylära egenskaper för denna separationsteknik. Här låter vi den önskade föreningen interagera med en stationär fas via vätebindning, joninteraktion, disulfidbryggor, hydrofob interaktion, etc. Molekylerna som inte interagerar med den stationära fasen kommer att eluera först. Således kan vi separera den från blandningen. Den önskade föreningen förblir bunden till den stationära fasen. Därför kan vi ta loss den med ett eluerande lösningsmedel och få den att eluera för att separera den också.
Figur 01: En kromatografisk kolumn
Affinitetskromatografi är användbar vid rening och koncentrering av ett ämne från en blandning med en buffertlösning. Det är också användbart för att minska oönskade ämnen i en blandning. När vi överväger apparaten som vi använder för denna process, bör vi använda en kolonn fylld med vår stationära fas. Sedan bör vi ladda den mobila fasen som innehåller biomolekylerna som vi ska separera. Låt dem sedan binda med den stationära fasen. Därefter, med hjälp av en tvättbuffert, kan vi separera icke-målbiomolekylerna, men målmolekylerna bör ha en hög affinitet för den stationära fasen för att separeringsprocessen ska lyckas.
Vad är jonbyteskromatografi?
Jonkromatografi är en form av vätskekromatografi där vi kan analysera joniska ämnen. Ofta använder vi det för att analysera oorganiska anjoner och katjoner (d.v.s. klorid- och nitratanjoner och kalium-, natriumkatjoner). Även om det är mindre vanligt, kan vi analysera organiska joner också. Dessutom kan vi använda denna teknik för rening av proteiner eftersom proteiner är laddade molekyler vid vissa pH-värden. Här använder vi en fast stationär fas till vilken de laddade partiklarna kan fästa. Till exempel kan vi använda hartset polystyren-divinylbensen-sampolymerer som det fasta underlaget.
Figur 02: Faser av jonbyteskromatografi
För att förklara detta ytterligare har den stationära fasen fixerade joner såsom sulfatanjoner eller kvartära aminkatjoner. Var och en av detta bör associeras med en motjon (en jon med motsatt laddning), om vi ska behålla neutraliteten i detta system. Häri, om motjonen är en katjon, benämner vi systemet som ett katjonbytarharts. Men om motjonen är en anjon är systemet ett anjonbytarharts.
Det finns fem huvudfaser i en jonbytesprocess;
- Inledande skede
- Adsorption av mål
- Start av eluering
- Slut på eluering
- Regeneration
Vad är skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi?
Affinitetskromatografi är en biokemisk teknik som vi använder för att separera komponenter i en blandning beroende på interaktionerna mellan dessa komponenter medan jonkromatografi är en form av vätskekromatografi där vi kan analysera joniska ämnen. Därför är den största skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi att vi endast kan använda jonbyteskromatografi för separation av joniska ämnen medan affinitetskromatografin kan separera både laddade och oladdade partiklar. När man överväger arbetsprincipen är skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi att affinitetskromatografin fortsätter på grund av det faktum att målmolekyler har en hög affinitet för den stationära fasen. Men för jonbyteskromatografi har målmolekyler en motsatt laddning till den på den stationära fasens yta.
Infografiken nedan visar skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi som en sida vid sida-jämförelse.
Sammanfattning – Affinitet vs jonbyteskromatografi
Sammanfattningsvis är affinitets- och jonbyteskromatografi två former av vätskekromatografiska tekniker. Den viktigaste skillnaden mellan affinitets- och jonbyteskromatografi är att vi kan använda affinitetskromatografi för att separera laddade eller oladdade komponenter i en blandning medan vi kan använda jonbyteskromatografi för att separera laddade komponenter i en blandning.
