Den viktigaste skillnaden mellan kompetitiv och icke-kompetitiv ELISA är att kompetitiv ELISA använder ett hämningsantigen medan icke-kompetitivt ELISA inte använder ett hämningsantigen för analysen.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) är en immunologisk analys som detekterar olika mål såsom antikroppar, antigener, proteiner och glykoproteiner. Det är en snabb och enkel metod att utföra. Därför används det oftare för forskning och diagnostiska ändamål. ELISA involverar användningen av enzymer och den specifika bindningen av antikroppar och antigen. Baserat på hur reaktionerna uppstår finns det fyra typer av ELISA: direkt ELISA, indirekt ELISA, sandwich-ELISA och inhibitions-ELISA. Direkt, indirekt och sandwich-ELISA är typer av icke-kompetitiv ELISA medan hämnings-ELISA är en typ av komplett ELISA. Huvudsyftet med den här artikeln är att diskutera skillnaden mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA.
Vad är Competitive ELISA?
Kompetitiv ELISA mäter antigenkoncentrationen i ett prov genom detektion av signalinterferens. Här använder analysen ett inhibitorantigen. Därför är det en typ av hämnings-ELISA. Under denna procedur tävlar antigenerna som finns i provet med det valda referensantigenet för att binda till en specifik mängd märkt antikropp. Dessutom inleds denna procedur med inkubationen av provet, med överskottsmängden märkt antikropp. Referensantigenet bör också förbeläggas på en analysplatta med flera brunnar. Därefter ska provblandningen läggas till analysplattan som innehåller referensantigenet. Fria antikroppar kommer att binda till referensantigenet beroende på mängden antigen i provet. Följaktligen, om mer provantigen är närvarande, kommer mindre referensantigen att detekteras. Det skapar alltså en svagare signal.
Figur 01: ELISA
Däremot, när provet innehåller mindre mängd antigen, kommer mer och mer referensantigen att ockupera antikropparna och ge en stark signal. Eftersom kompetitiv ELISA ger en starkare signal när provet innehåller en låg mängd antigener, är kompetitiv ELISA en mycket känslig analys, även för prover med ett litet antal antigener.
I vissa konkurrerande ELISA-kit används ett märkt antigen istället för en märkt antikropp. Här kommer det märkta antigenet och provantigenet att konkurrera om bindning till den primära antikroppen. På liknande sätt, när mängden antigen i provet är låg, kommer mängden märkt antigen som binder till antikroppar att vara högre och skapa en starkare signal.
Vad är icke-kompetitiv ELISA?
Bland de fyra typerna av ELISA är tre typer icke-konkurrenskraftig ELISA. De är direkt ELISA, indirekt ELISA och sandwich-ELISA. Alla tre formaten fungerar enligt den gemensamma principen för ELISA med små skillnader i sina metoder.
Direct ELISA använder en enzymmärkt primär antikropp. Därför kräver den inte en sekundär antikropp. Därför är direkt ELISA snabbare än andra typer av ELISA. Den primära antikroppen kommer direkt att binda till det immobiliserade målantigenet som finns i plattan. Därför kommer enzym-substratreaktionen att äga rum, vilket ger en synlig signal.
Figur 02: Sandwich ELISA
Till skillnad från direkt ELISA använder indirekt ELISA en omärkt primär antikropp och en enzymmärkt sekundär antikropp. När den primära antikroppen väl binder till det immobiliserade antigenet, binder den sekundära antikroppen till den primära antikroppen. Enzymet i den sekundära antikroppen kommer att reagera med antigenet och producera en synlig signal. Sandwich ELISA skiljer sig från både direkt och indirekt ELISA. Här är antikroppen immobiliserad på väggen av analysplattan.
Vilka är likheterna mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA?
- Kompetitiv och icke-kompetitiv ELISA är två typer av immunosorbentanalystekniker.
- De är mycket flexibla och känsliga tekniker.
- Dessutom är både kompetitiv och icke-kompetitiv ELISA enzymkopplade immunanalyser.
- Båda metoderna genererar dessutom en signal på grund av en enzym-substratreaktion.
Vad är skillnaden mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA?
Kompetitiv ELISA är en typ av ELISA som bygger på kompletteringen mellan analytantigen och märkt antigen för en begränsad mängd specifik antikropp. Å andra sidan existerar ingen sådan konkurrens mellan antigen av intresse och referensantigen i icke-kompetitiv ELISA. Detta är alltså nyckelskillnaden mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA. På liknande sätt är kompetitiv ELISA en hämnings-ELISA medan icke-kompetitiv ELISA inte är en hämnings-ELISA. Så detta är också en skillnad mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA.
Dessutom är kompetitiv ELISA mer lämplig för att mäta en låg mängd antigen av intresse. Det är en känslig metod. Å andra sidan beror icke-kompetitiv ELISA inte på antalet antigener som finns i ett prov. Därför är detta också en skillnad mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA.
Infografiken nedan förklarar skillnaden mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA i jämförelse.
Sammanfattning – konkurrenskraftig vs icke-konkurrenskraftig ELISA
Kompetitiv och icke-kompetitiv ELISA är de två huvudtyperna av ELISA eller enzymkopplade immunosorbentanalyser. För att sammanfatta skillnaden mellan kompetitiv och icke-kompetitiv ELISA, bygger den kompetitiva ELISA på konkurrensen mellan antigen av intresse och referensantigen mot den begränsade mängden antikroppar. Därför kallas kompetitiv ELISA också som hämnings-ELISA. Å andra sidan förlitar sig icke-kompetitiv ELISA inte på konkurrensen mellan målantigener och referensantigener. Den använder ett överskott av märkt specifik antikropp mot analyten av intresse. Detta är alltså nyckelskillnaden mellan konkurrenskraftig och icke-konkurrenskraftig ELISA. Direkt ELISA, indirekt ELISA och sandwich-ELISA är de tre huvudtyperna av icke-kompetitiv ELISA.
