Nyckelskillnaden mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys är att kolorimetrisk analys bestämmer koncentrationen av färgade föreningar i en lösning medan fluorometrisk analys bestämmer den kinetiska mekanismen för en lösning.
En biokemisk analys är en teknik som detekterar eller kvantifierar aktiviteten hos en biologisk molekyl eller ett ämne analytiskt. Det är en in vitro process. Kolorimetrisk analys och fluorometrisk analys är två typer av vanliga biokemiska analyser som utförs i laboratorier. Flera tekniker såsom ELISA och western blotting är också komplexa biokemiska analyser för kvantifiering av metabolisk aktivitet och mätning av det funktionella beteendet hos biomolekyler såsom proteiner, enzymer och andra små molekyler. Dessa typer av analyser används för att identifiera interaktioner mellan protein-DNA, protein-RNA och protein-protein.
Vad är en kolorimetrisk analys?
En kolorimetrisk analys är en teknik som bestämmer koncentrationen av färgade föreningar i en lösning. Med andra ord är kolorimetrisk analys en reaktion som leder till en färgförändring på grund av en enzymatisk eller kemisk reaktion mellan reagenser och analyter. Kolorimetriska analyser utövas inom biokemi för att testa för enzymer, specifika föreningar, hormoner, antikroppar och andra analyter. De använder kolorimetrar eller spektrofotometrar. Kolorimetrar är instrument som karakteriserar färgade prover för att ge ett objektivt mått på färgegenskaper. En spektrofotometer är en anordning som mäter ljusintensiteten som en funktion av ljusets färg eller våglängd.
Figur 01: Kolorimetrisk analys
Hur fungerar en kolorimetrisk analys?
I en kolorimetrisk analys förbereds en platta med en speciell antikropp bunden till brunnar. Därefter tillsätts provet. Detta kan göra att provet binder till antikroppen. Sedan tillsätts en detektionsantikropp och ett substrat till brunnarna för att reagera med detektionssonden. Stopplösning tillsätts i slutet före avläsningen. En tom brunn som kallas blank lämnas utan provet. I den kolorimetriska analysen, ju mörkare färg, desto högre analytkoncentration. Vanligtvis behövs bara en våglängd för att ta avläsningen. Men om det finns en referensmätning används två eller flera våglängder.
Vad är en fluorometrisk analys?
Den fluorometriska analysen är en teknik som bestämmer den kinetiska mekanismen för enzymreaktioner. En fluorometrisk analys äger rum med en bildning av en fluorescerande produkt från ett icke-fluorescerande substrat eller vice versa. Denna analys använder också fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) där den enzymatiska reaktionen ändrar positionen för två fluoroforer i substratet och därmed ändrar fluorescensintensiteten.
Figur 02: Fluorometrisk analys
Fluorometriska analyser är i allmänhet mycket känsligare än andra analyser. De diagnostiska enzymuppskattningarna i vävnads-, cell- eller vätskeprover från patienter ökar på grund av dess högre känslighet.
Hur fungerar en fluorometrisk analys?
I en fluorometrisk analys tillsätts ett substrat till provet i plattan, och fluorescenssvaret tas med hjälp av plattläsaren. Här mäts varje cell separat. Opaka plattor används i fluorometriska analyser. Detta minskar spridningen av ljus. Två våglängder är nödvändiga för denna typ av analys. En våglängd är för att detektera excitationen och den andra våglängden är för emissionen.
Vilka är likheterna mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys?
- Kolorimetrisk analys och fluorometrisk analys är två typer av biokemiska analyser.
- Båda analyserna utförs för medicinsk diagnostik.
- Dessa analyser involverar en enzymatisk reaktion.
- Båda analyserna involverar ett substrat och analyter.
Vad är skillnaden mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys?
En kolorimetrisk analys är en teknik som bestämmer koncentrationen av färgade föreningar i en lösning, medan fluorometrisk analys är en teknik som bestämmer den kinetiska mekanismen för enzymreaktioner. Så detta är nyckelskillnaden mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys. Dessutom är de fluorometriska analyserna känsligare än de kolorimetriska analyserna; sålunda har fluorometriska analyser förmågan att detektera fler analyter. Således är detta en annan viktig skillnad mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys. Dessutom kräver fluorometriska analyser två våglängder, medan kolorimetriska analyser utförs med en våglängd.
Infografiken nedan visar fler skillnader mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys.
Sammanfattning – kolorimetrisk vs fluorometrisk analys
En biokemisk analys är en analytisk process som används för att bestämma och kvantifiera cellulära metaboliska reaktioner. Kolorimetrisk analys och fluorometrisk analys är två typer av biokemiska analyser. Kolorimetrisk analys är en reaktion som leder till en färgförändring på grund av en enzymatisk eller kemisk reaktion mellan reagenser och analyter medan fluorometrisk analys är en teknik som används för att bestämma den kinetiska mekanismen för enzymreaktioner. Båda analyserna beror på en enzymatisk reaktion som involverar ett substrat och en analyt. Fluorometriska analyser är känsligare än kolorimetriska analyser. Det viktigaste är att fluorometriska analyser kräver två våglängder, medan kolorimetriska analyser kan utföras med endast en våglängd. Detta sammanfattar alltså skillnaden mellan kolorimetrisk och fluorometrisk analys.
