Nyckelskillnaden mellan gelfiltrering och affinitetskromatografi är att gelfiltreringskromatografi beror på skillnaderna i molekylvikt eller storlek hos analytprovet, medan affinitetskromatografi beror på affiniteten hos en analyt till en immobiliserad ligand.
Begreppet kromatografi i analytisk kemi syftar på processen för separation av komponenter i en blandning med hjälp av olika tekniker. Kromatografi är ett samlingsnamn som representerar ett flertal olika metoder för separation.
Vad är gelfiltreringskromatografi?
Gelfiltreringskromatografi är en analytisk teknik där separationen av komponenter beror på skillnaden i molekylvikt eller storlek. Denna teknik är också känd som storleksuteslutningskromatografi eller molekylsiktskromatografi. Separationstekniken i denna process beror på den olika förmågan hos molekylerna i provet att komma in i porerna i gelfiltreringsmediet.
I gelfiltreringstekniken innehåller den stationära fasen pärlor av hydratiserat, svampliknande material med porer av molekylära dimensioner som innehåller ett sm alt intervall av storlekar. Om vi passerar en vattenlösning bestående av molekyler av olika storlekar genom en kolonn som innehåller dessa "molekylsilar", rör sig molekylerna som är större än porerna i filtreringsmediet snabbt genom kolonnen. Däremot kommer de mindre molekylerna in i geléns porer och tenderar att röra sig långsamt genom kolonnen. Molekyler eluerar från kolonnen i ordning efter minskande molekylstorlek. Här är exkluderingsgränsen för gelén molekylmassan för de minsta molekylerna som inte kan penetrera porerna i en given gel.
Det finns olika typer av gelfiltreringstekniker, t.ex. indirekt gelfiltreringsmetod, steady-state gelfiltrering, gelpärldialys, etc. Indirekt gelfiltreringskromatografi är användbar vid bestämning av fria sköldkörtelhormoner. Steady-state gelfiltreringskromatografi är en indirekt teknik som främst är användbar för mätning av fria steroider som kortisol, testosteron etc. Gelpärldialys är å andra sidan en modifiering av steady-state gelfiltrering som är jämförelsevis enklare.
Vad är affinitetskromatografi?
Affinitetskromatografi är en analytisk teknik och en separationsmetod som beror på en specifik bindningsinteraktion mellan en immobiliserad ligand och dess bindningspartner. Några exempel inkluderar antikropp-antigenbindning, enzym-substratbindning och enzym-inhibitorbindning. Därför har denna teknik många viktiga tillämpningar inom nukleinsyrarening, proteinrening från cellextrakt och rening från blod.
I den här tekniken är den viktigaste egenskapen ligandimmobilisering. Vi kan använda olika material som akrylater och silikagel för detta. Det är viktigt att förhindra sterisk interferens av målmolekylen till liganden. Dessutom är en inhibitor fäst till den fasta fasen. Vi kallar denna inhibitor en spacer. Klassiskt sett består en spacer av en kolvätekedja.
Den stationära fasen av affinitetskromatografin innehåller kärnan, spacern och liganden. Ibland har den också en metalljon som är kopplad till liganden. Den mest föredragna fasta fasen för den stationära fasen i denna teknik är agarosgel eftersom den lätt dispenseras för att fylla och packa kolonnen med hartsbäddar av vilken storlek som helst, och den är tillräckligt stor för att biomolekyler ska flöda fritt in i och genom pärlorna. Liganderna kan kovalent fästa till pärlpolymeren på olika sätt. De vanligaste spacerföreningarna är cyanbromid, epoxid, epoxid med C6-syra och diamin. Å andra sidan skiljer sig liganden vi kan använda beroende på målet, t.ex. antikropp-antigen, järn- eller aluminiumjoner-fosfoproteiner, avidin-biotin, glutation-GST, kelator-His-taggade proteiner, etc.
Vad är skillnaden mellan gelfiltrering och affinitetskromatografi?
Kromatografi är en viktig analysteknik. Gelfiltreringskromatografi och affinitetskromatografi är två viktiga varianter av kromatografi. Den viktigaste skillnaden mellan gelfiltrering och affinitetskromatografi är att gelfiltreringskromatografi beror på skillnaderna i molekylvikt eller storlek hos analytprovet, medan affinitetskromatografi beror på affiniteten hos en analyt till en immobiliserad ligand.
Sammanfattning – Gelfiltrering vs affinitetskromatografi
Det finns olika typer av kromatografiska tekniker beroende på deras tillämpning och typ av analytprov. Gelfiltrering och affinitetskromatografi är två sådana typer av tekniker. Den viktigaste skillnaden mellan gelfiltrering och affinitetskromatografi är att gelfiltreringskromatografi beror på skillnaderna i molekylvikt eller storlek hos analytprovet, medan affinitetskromatografi beror på affiniteten hos en analyt till en immobiliserad ligand.
