Den viktigaste skillnaden mellan agaros- och polyakrylamidgelelektrofores är att agarosgelelektrofores använder horisontellt hällda agarosgeler för att separera jämförelsevis större fragment av DNA, medan polyakrylamidgelelektrofores använder vertik alt hällda polyakrylamidgeler för att separera kortare nukleinsyrafragment.
Elektrofores är en typ av teknik som använder ett elektriskt fält som appliceras över en gelmatris för att separera biomolekyler som DNA, RNA och proteiner. Denna separation av biomolekyler som DNA, RNA och proteiner genom elektrofores är baserad på laddning och storlek. Prover laddas i geléns brunnar. Senare appliceras det elektriska fältet över gelén. Fältet gör att negativt laddade molekyler rör sig mot den positiva elektroden. Gelmatrisen fungerar som en molekylsil genom vilken de minsta molekylerna passerar eller färdas snabbt medan större molekyler rör sig långsamt. Detta möjliggör separation av molekyler baserat på laddning och storlek. Därför är agaros- och polyakrylamidgelelektrofores två typer av gelelektroforestekniker som huvudsakligen hjälper till att separera molekyler baserat på deras storlek och laddning.
Vad är agarosegelelektrofores?
Agarosgelelektrofores är en teknik som använder agarosgeler för att separera ut biomolekyler som DNA och RNA. Det är en teknik som används för att separera nukleinsyror främst efter storlek. Den huvudsakliga föreningen som kallas agaros som används i denna teknik är en polysackarid. Det kommer från sjögräs. Agaros kan lösas i kokande buffert och sedan kan hällas i en bricka som hålls horisontellt. I brickan stelnar den när den svalnar till en platta. Agarosgeler hälls med en kam på plats för att göra brunnar i vilka nukleinsyror som DNA eller RNA laddas när gelén har stelnat.
Figur 01: Agarose Gel Elektrofores
Gelen nedsänks senare i en lämplig buffert och en ström appliceras över gelén. DNA har en enhetlig negativ laddning som är oberoende av molekylens sekvenssammansättning. Därför kommer DNA-molekyler att migrera från katoden (-) mot anoden (+). Migrationshastigheten är direkt beroende av molekylens storlek. De största makromolekylerna har svårast att navigera genom gelén. Å andra sidan glider de mindre makromolekylerna genom gelén snabbt och ganska lätt.
Vad är polyakrylamidgelelektrofores?
Polyakrylamidgelelektrofores (PAGE) är en teknik som använder polyakrylamidgeler för att separera ut biomolekyler. Det är en teknik som används flitigt för att separera biologiska makromolekyler, vanligtvis proteiner och nukleinsyror, enligt deras elektroforetiska rörlighet. Hydratiseringen av akrylnitril resulterar i bildandet av akrylamidmolekyler av nitrilhydratas. Akrylamid är löslig i vatten, och vid tillsats av initiatorer av fria radikaler polymeriserar akrylamid, vilket resulterar i bildandet av polyakrylamidgel. Norm alt resulterar ökade koncentrationer av akrylamid i minskad porstorlek i gelén. Polyakrylamidgeler hälls vertik alt, till skillnad från agarosgeler.
Figur 02: Polyakrylamidgelelektrofores
I polyakrylamidgelelektrofores kan molekylerna köras i sitt ursprungliga tillstånd, vilket bevarar molekylernas högre ordningsstruktur. Denna metod kallas native PAGE. Alternativt kan ett kemiskt denatureringsmedel också tillsättas för att ta bort den högre ordningens struktur och förvandla molekylen till en ostrukturerad molekyl vars rörlighet endast beror på dess längd. Denna typ kallas SDS-PAGE.
Vilka är likheterna mellan agaros och polyakrylamidgelelektrofores?
- Agaros- och polyakrylamidgelelektrofores är två typer av gelelektroforestekniker.
- De är faktiskt molekylärbiologiska tekniker.
- Båda teknikerna används för att detektera biologiska makromolekyler som DNA och proteiner.
- Dessa tekniker utförs av skickliga tekniker eller forskare.
- I båda teknikerna baseras separationen av makromolekyler på laddningen och storleken.
- Båda teknikerna tillåter separation av nukleinsyror som DNA och RNA.
Vad är skillnaden mellan agaros och polyakrylamidgelelektrofores?
Agarosgelelektrofores är en teknik som använder horisontellt hällda agarosgeler för att separera ut biomolekyler, medan polyakrylamidgelelektrofores är en teknik som använder vertik alt hällda polyakrylamidgeler för att separera ut biomolekyler. Detta är nyckelskillnaden mellan agaros- och polyakrylamidgelelektrofores. Vidare används agarosgelelektrofores för separation av DNA och RNA, medan polyakrylamidgelelektrofores används för separation av nukleinsyror såsom DNA, RNA eller proteiner.
Följande tabell sammanfattar skillnaden mellan agaros- och polyakrylamidgelelektrofores.
Sammanfattning – Agarose vs polyakrylamidgelelektrofores
Agaros- och polyakrylamidgelelektrofores är två typer av gelelektroforestekniker som används i molekylärbiologiska laboratorier. Agarosgelelektrofores använder en agarosgel för att separera ut biomolekyler. Agaros är i allmänhet inte giftigt för människor, medan polyakrylamid är giftigt för människor. Dessutom visar agarosgelelektrofores en låg upplösning medan polyakrylamidgelelektrofores visar en mer upplösning. Polyakrylamidgelelektrofores använder en polyakrylamidgel för att separera ut biomolekyler. Detta sammanfattar skillnaden mellan agaros och polyakrylamidgelelektrofores
