PCR vs re altids-PCR
PCR eller polymeraskedjereaktion är en revolutionerad upptäckt inom modern molekylärbiologi, som först utvecklades av kemisten Kary Mullis 1983. Den gör att en enda sekvens i ett komplext DNA kan amplifieras för analys. Grundtanken med PCR är att två primrar, som är komplementära till de motsatta strängarna i en DNA-sekvens, är orienterade mot varandra; primrarna producerar komplementära strängar, som var och en innehåller den andra primern. Följaktligen är resultatet en stor mängd av en sekvens som motsvarar det DNA som ligger mellan de två primrarna. DNA-polymerasenzym används för att förlänga primrarna i PCR. DNA-polymeras är ett termostabilt enzym och det har förmågan att överleva i höga temperaturer (94 till 95 °C) som används för denaturering av mall-DNA.
PCR innefattar tre steg, nämligen upprepade omgångar av denaturering, hybridisering av primrar och syntes av DNA. En termocyklermaskin används för att utföra denna reaktion så att den kan programmeras att ändra temperaturerna snabbt och exakt. Tillämpningar av PCR är brottsutredningar, DNA-fingeravtryck, upptäckt av patogener och analys av DNA från tidiga mänskliga arter.
Vad är konventionell PCR?
Det finns tre huvudstadier av konventionell PCR, nämligen; DNA-amplifieringssteg, separation av PCR och detektion av produkter. Separation av DNA-segment görs vanligtvis genom agarosgelelektrofores. Produkterna färgas sedan med etheiduimbromid. Slutligen uppnås detektion genom visualisering av band på geler under UV-ljus. Därför uttrycks de slutliga resultaten av konventionell PCR inte som siffror. Norm alt kan den konventionella PCR bara detektera en enda parameter.
Vad är re altids-PCR?
Re altids-PCR kan upptäcka amplifiering av produkter när produkterna syntetiseras. I och med teknikens utveckling har PCR blivit en mycket populär teknik, speciellt för upptäckt och identifiering av bakterier i livsmedel. Re altids-PCR använder ett fluorescerande färgsystem och termocykler utrustad med fluorescerande detekteringsförmåga.
Vad är skillnaden mellan konventionell PCR och re altids-PCR?
• Konventionell PCR är mer tidskrävande eftersom den använder gelelektrofores för att analysera de amplifierade PCR-produkterna. Däremot är re altids-PCR mindre tidskrävande eftersom den kan detektera amplifieringar under reaktionens tidiga faser.
• Re altids-PCR samlar in data vid den exponentiella tillväxtfasen av PCR medan traditionell PCR samlar in data vid reaktionens slutpunkt.
• Slutpunktsresultaten för den konventionella PCR:n kanske inte är särskilt exakta, men resultaten av re altids-PCR är mycket exakta.
• Re altids-PCR är känsligare än konventionell PCR.
• Konventionell PCR har mycket dålig upplösning medan re altids-PCR kan upptäcka mycket små förändringar på grund av den höga upplösningen.
• Slutpunktsdetektering av konventionell PCR har kort dynamiskt omfång medan re altids-PCR-detektion har ett brett dynamiskt omfång.
• Till skillnad från konventionell PCR, finns automatiserade detekteringstekniker i re altids-PCR.
• Konventionell PCR är mycket sofistikerad och arbetsintensiv mer än re altids-PCR.
• Till skillnad från re altids-PCR kan konventionell PCR inte skilja mellan döda och levande bakterier.
• Re altids-PCR använder fluorescerande färgsystem för att detektera produkterna medan konventionell PCR använder etidiumbromid och UV-ljus för att visualisera band i agarosgelmediet.
