nyckelskillnad – gramfärgning vs syrasnabb
Bakterier är mycket små mikroorganismer. De är genomskinliga och det är svårt att upptäcka dem under levande och obefläckade förhållanden. Således utvecklas olika färgningsmetoder för att underlätta bakteriell upptäckt. Det finns tre huvudtyper av färgningstekniker: enkel färgning, differentiell färgning och strukturell färgning. Differentialfärgning är en teknik som använder mer än en färgning för att differentiera bakterier. Gramfärgning och syrafast färg är mest populärt kända som differentialfärger. Gramfärgning är en differentiell färgningsteknik som separerar bakterier i två grupper som kallas grampositiva bakterier och gramnegativa bakterier. Den syrafasta färgen är en differentialfärgning som används för att identifiera syrafasta organismer som Mycobacterium från icke-syrafasta organismer. Detta är den viktigaste skillnaden mellan Gram-färgning och Acid Fast-färgning.
Vad är Gram Stain?
Gramfärgning är en viktig differentiell färgningsteknik som används för bakteriell identifiering inom mikrobiologi. Denna teknik introducerades av den danske bakteriologen Hans Christian Gram 1884. Gramfärgning kategoriserar bakterier i två huvudgrupper som heter grampositiva och gramnegativa, vilka är mycket viktiga för bakterieklassificering och identifiering. Mikrobiologer utför gramfärgning som ett första steg i bakteriell karakterisering under sina studier.
Bakterier grupperas baserat på skillnaderna i deras cellvägg. Grampositiva bakterier består av ett tjockt peptidoglykanlager i cellväggen medan gramnegativa bakterier består av ett tunt peptidoglykanlager i cellväggen. Resultatet av gramfärgningen kommer att baseras på skillnaden i tjockleken på peptidoglykanskiktet i cellväggen.
Gramsfärgning utförs med fyra olika reagens, nämligen; primärfläck, betningsmedel, avfärgningsmedel och motfläck. Kristallviolett och safranin används som primär- respektive motfärgning, medan gram jod och 95 % alkohol används som betningsmedel respektive avfärgningsmedel. De grundläggande stegen för gramfärgning är följande;
- Ett bakterieutstryk bereds på ett rent objektglas, värmefixeras och kyls.
- Smeta är översvämmad med kristallviolett i 1 – 2 minuter.
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten för att ta bort överflödiga fläckar.
- Gram jod appliceras på utstryket i 1 minut.
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten
- Smear tvättas med 95 % alkohol i 2 – 5 sekunder och sköljs med långsamt rinnande kranvatten.
- Smeta är motfärgad med safranin i 1 minut
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten, torkas och observeras under mikroskop.
I slutet av gram-färgningen kommer gramnegativa bakterier att observeras i rosa färg medan grampositiva bakterier kommer att observeras i lila färg.
Figur 01: Gramnegativa och Grampositiva bakterier
Utfallet av gramfärgningen avgörs av tjockleken på peptidoglykanlagret i cellväggen. Under avfärgningssteget avlägsnas den primära fläcken och betningsmedlet lätt från de gramnegativa bakterierna och blir färglösa eftersom de har ett tunt peptidoglykanskikt. Den primära fläcken finns kvar i de grampositiva bakterierna eftersom de har ett tjockt peptidoglykanlager. Motfärgningen kommer inte att vara effektiv för grampositiva bakterier på grund av kvarhållandet av den primära fläcken. Sålunda kommer grampositiva bakterier att synas i primär färg, det vill säga lila färg. Motfläcken kommer att färga de gramnegativa bakterierna, och de kommer att synas i plockfärgen, som är safraninfärgen. Därför är det lätt att kategorisera bakterier i två grupper efter gramfärgning och det är värdefullt för bakteriell differentiering och identifiering.
Vad är Acid Fast?
Surafasthet är en fysisk egenskap hos vissa bakterier, särskilt deras motståndskraft mot avfärgning av syror under färgningsprocedurer. När de väl är färgade motstår dessa organismer utspädda syra- och/eller etanolbaserade avfärgningsförfaranden som är vanliga i många färgningsprotokoll. Således ges namnet "syrafast" till dessa organismer. Denna egenskap visas på grund av att de har en hög nivå av vaxartat material (mykolsyror) i sina cellväggar. Detta test är avgörande för identifiering av Mycobacterium tuberculosis.
Figur 2: Sura snabba mykobakterier
Denna syrafasta färg utvecklades av Paul Ehrlich 1882. Ehrlichs syrafasta teknik modifierades av Ziehl-Neelsen och den används nu oftare. Syrafast färgningsprocedur involverar tre olika reagenser. Carbol fuschin används som den primära färgen. Sur alkohol används som avfärgningsmedel. Metylenblått används som motfärgning. Färgningsproceduren utförs enligt följande.
- Den primära färgen (karbolfuchsin) appliceras på det fixerade provet på objektglaset (alla celler kommer att färgas i röd färg).
- Objektglaset värms upp genom ångning i 5 minuter, vilket driver in fläckarna ordentligt i cellerna.
- Sedan tillsätts den avfärgande lösningen (Detta tar bort det röda färgämnet från alla celler utom de syrafasta bakterierna).
- Metylenblått tillsätts som en motfärgning (den färgar alla avfärgade bakterieceller).
- Sura snabba bakterier förblir röda medan icke-syrasnabba bakterier färgas i blått.
Vilka är likheterna mellan Gram Stain och Acid Fast?
- Gramfärgning och Acid fast är två olika färgningstekniker.
- Båda teknikerna kategoriserar bakterier i två grupper.
- Båda teknikerna använder två fläckar och en avfärgning.
Vad är skillnaden mellan Gram Stain och Acid Fast?
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gramfärgning är en differentiell färgningsteknik som separerar bakterier i två grupper Gram-positiva bakterier och Gram-negativa bakterier. | Acid Fast stain är en differentialfärgning som används för att identifiera syrafasta organismer från icke-syrafasta organismer. |
| Primary Stain | |
| Kristallviolett är den vanligaste primärfärgen vid gramfärgning. | Carbol fuchsin är den primära fläcken som används i syrafasta. |
| Avfärgningsmedel | |
| 95 % alkohol används som avfärgningsmedel i gramfläckar. | Syrlig alkohol används som avfärgningsmedel i syrafast. |
| Counter Stain | |
| Gramfärgning använder safranin som motfläck. | Acid fast stain använder metylenblått som motfläck. |
| Observation | |
| Gramnegativa bakterier observeras i plockfärg och grampositiva bakterier observeras i lila färg. | Acid Fast-bakterier observeras i röd färg och icke-syrafasta bakterier observeras i blå färg. |
Sammanfattning – Gramfärgning vs Acid Fast
Visualisering av mikroorganismer i levande tillstånd är svårt. Därför används biologiska fläckar och färgningsförfaranden i stor utsträckning för att studera deras egenskaper. Differentialfärgning är en typ av färgningsteknik som används för att differentiera bakterier. Gramfärgning och syrafast färgning är två olika färgningstekniker. Gramfärgning skiljer gramnegativa bakterier och grampositiva bakterier baserat på tjockleken på deras cellväggar. Syra snabb färgning skiljer sura snabba bakterier från icke sura snabba bakterier baserat på mykolsyrah alten i cellväggen. Detta är skillnaden mellan syrafast och gramfärgning.
Ladda ner PDF-version av Gram Stain vs Acid Fast
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här. Skillnaden mellan Gram Stain och Acid Fast.
