Key Difference – Gram Stain vs Culture
Gramfärgning är en färgningsteknik som utförs för att differentiera bakterier i två grupper efter tjockleken på peptidoglykanskiktet i deras cellvägg. Odling är en metod för att odla och underhålla mikroorganismer under laboratorieförhållanden för olika analyser. Den viktigaste skillnaden mellan gramfärgning och kultur är deras funktion; gram-stam en färgningsteknik för bakterier där odling är en metod för att odla och underhålla mikroorganismer.
Vad är Gram Stain?
Gramfärgning är en viktig differentiell färgningsteknik som används för bakteriell identifiering inom mikrobiologi. Denna teknik introducerades av den danske bakteriologen Hans Christian Gram 1884. Gramfärgning kategoriserar bakterier i två huvudgrupper: grampositiva och gramnegativa; dessa är mycket viktiga vid bakterieklassificering och identifiering. Gramfärgning utförs som ett första steg för bakteriell karakterisering.
Bakterier grupperas baserat på skillnaderna i deras cellvägg. Grampositiva bakterier innehåller ett tjockt peptidoglykanlager i sin cellvägg medan gramnegativa bakterier innehåller ett tunt peptidoglykanlager i sin cellvägg som visas i figur 01. Resultatet av gramfärgningen kommer att baseras på tjockleksskillnaden i peptidoglykanlagret i cellvägg.
Figur 1: Grampositiva bakterier och Gramnegativa bakterier
Gramsfärgning utförs med fyra olika reagens, nämligen; primärfläck, betningsmedel, avfärgningsmedel och motfläck. Kristallviolett och safranin fungerar som primär- respektive motfärgning, medan gram jod och 95 % alkohol fungerar som betningsmedel respektive avfärgningsmedel.
Basic Steps of Grams Stain
- Ett bakterieutstryk bereds på ett rent objektglas, värmefixeras och kyls.
- Smeta är översvämmad med kristallviolett i 1 – 2 minuter.
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten för att ta bort överflödiga fläckar.
- Gram jod appliceras på utstryket i 1 minut.
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten
- Smear tvättas med 95 % alkohol i 2 – 5 sekunder och sköljs med långsamt rinnande kranvatten.
- Smeta är motfärgad med safranin i 1 minut
- Smeta sköljs med långsamt rinnande kranvatten, torkas och observeras under mikroskop.
I slutet av gramfärgningen kommer gramnegativa bakterier att observeras i rosa färg medan de grampositiva bakterierna kommer att observeras i lila färg som visas i figur 02. Resultatet av gramfärgningen avgörs av tjockleken av peptidoglykanlagret i deras cellvägg. Under avfärgningssteget avlägsnas den primära fläcken och betningsmedlet lätt från de gramnegativa bakterierna och blir färglösa eftersom de har ett tunt peptidoglykanskikt. Den primära fläcken finns kvar i de grampositiva bakterierna eftersom de har ett tjockt peptidoglykanlager. Motfärgning kommer inte att vara effektiv för grampositiva bakterier på grund av kvarhållandet av den primära fläcken. Så grampositiva bakterier kommer att synas i den primära färgen, det vill säga lila färg. Motfärgning kommer att färga de gramnegativa bakterierna och kommer att synas i plockfärgen som är safraninfärgen. Därför är det lätt att kategorisera bakterier i två grupper efter gramfärgningen och det är värdefullt för bakteriell differentiering och identifiering.
Figur 2: Gram-stam
Vad är kultur?
Mikrobiell kultur är en metod för att odla och underhålla mikroorganismer under laboratorieförhållanden för olika ändamål. Kulturer odlas i fasta, halvfasta och flytande medier baserat på typen och syftet med mikroorganismodlingen. Kulturer förses med nödvändiga näringsämnen och tillväxtförhållanden som krävs av mikroorganismerna. Det finns olika komponenter i ett odlingsmedium såsom energikälla, kolkälla, kvävekälla, mineraler, mikronäringsämnen, vatten, stelningsmedel etc. Optimal temperatur, syre och pH bör justeras efter typen av mikroorganism som odlas.
Det finns olika typer av mikrobiella kulturer; till exempel batchkultur, kontinuerlig odling, stickkultur, agarplattodling, buljongkultur, etc. Beroende på sammansättningen av odlingsmediet finns det olika typer av odlingsmedier som kallas syntetiska medier, halvsyntetiska medier och naturliga medier. Mikrobiella kulturer bereds under sterila förhållanden inuti en speciell kammare som kallas laminärt luftflöde. Odlingsmediet och glasvarorna steriliseras före ympning av den önskade mikroorganismen. Under korrekta sterila förhållanden överförs målmikroorganismen till det steriliserade näringsmediet och inkuberas vid optimal temperatur. Inuti mediet kommer mikroorganismen att växa och föröka sig med hjälp av de medföljande näringsämnena.
Figur 3: En bakteriekultur på tallrik
Vad är skillnaden mellan Gram Stain och Culture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Grams-stam är en differentiell färgningsteknik som används för bakteriell differentiering och identifiering. | Mikrobiell kultur är en metod för att odla mikroorganismer i laboratoriet. |
| Components | |
| Detta använder olika reagens inklusive två fläckar. | Detta använder olika odlingsmedier såsom fasta, halvfasta och flytande medier som består av näringsämnen och andra nödvändiga förhållanden. |
| Grundläggande funktioner | |
| Detta tillåter gruppering av bakterier i två grupper: gramnegativa och grampositiva. | Detta tillåter multiplikation av mikroorganismer för olika ändamål. |
| Base | |
| Gramfärgningsresultatet baseras på skillnaderna i peptidoglykanskiktet i cellväggen. | Mikroorganismer kommer att växa och föröka sig inuti odlingsmediet. |
| Utfall | |
| Gramnegativa bakterier är synliga i rosa färg och grampositiva bakterier är synliga i lila färg. | På tallrikar kan kolonier av mikroorganismerna ses. På flytande media är mikroorganismer i suspenderad form. |
Sammanfattning – Gram Stain vs Culture
Mikrobiella kulturer bereds och underhålls under laboratorieförhållanden för olika ändamål, såsom lagring, testning, kemisk rening, etc. Gramfärgning är en färgningsprocedur som differentierar bakterier i två huvudgrupper som kallas gramnegativa bakterier och grampositiva bakterier. Därför är skillnaden mellan gramfärgningen och kulturen att gramfärgningen är en färgningsteknik för bakterier medan kulturen är en metod för att odla och underhålla mikroorganismer i laboratorierna.
