Nyckelskillnaden mellan isokratisk eluering och gradienteluering är att isokratisk eluering avser att upprätthålla en konstant koncentration i den mobila fasen, medan gradienteluering avser att bibehålla en varierande koncentration i den mobila fasen.
Termen isokratisk och gradienteluering används i kromatografi. Under en kromatografisk körning använder vi en stationär fas, som är ett icke-rörligt ämne, tillsammans med en mobil fas, det rörliga ämnet. Den isokratiska och gradientelueringen beskriver egenskaperna hos den mobila fasen.
Vad är isokratisk eluering?
Isokratisk eluering är en term som används i kromatografi när den mobila fasen har en konstant koncentration. Här är koncentrationen av den mobila fasen konstant under hela den kromatografiska processen. I denna process kan vi observera att toppbredden ökar med retentionstiden linjärt i kromatogrammet. Detta leder dock till en nackdel – de sena eluerande topparna för sen eluering blir mycket platta och breda. Därför blir dessa breda toppar svåra att känna igen som toppar.
Dessutom, i isokratisk eluering, ändras inte selektiviteten enligt kolumndimensionerna. Detta innebär att selektiviteten inte beror på ändringarna i kolumndimensionerna. Här betraktas längden och diametern som kolumndimensioner. Därför eluerar topparna i samma ordning.
Vad är gradienteluering?
Gradienteluering är en term som används inom kromatografi när den mobila fasen här har en varierande koncentration. Med andra ord, koncentrationen av den mobila fasen behöver inte förbli konstant. Till exempel, i HPLC, använder en vanlig separationsmetod metanol 10% initi alt och slutar vid 90%, genom att öka koncentrationen gradvis. Den mobila fasen har två komponenter: ett svagt lösningsmedel och ett starkt lösningsmedel. Svagt lösningsmedel tillåter det lösta ämnet att eluera långsamt medan starkt lösningsmedel orsakar snabb eluering av det lösta ämnet. I omvänd faskromatografi använder vi vatten som det svaga lösningsmedlet och organiskt lösningsmedel som det starka lösningsmedlet.
Figur 01: HPLC
Dessutom minskar gradientelueringsmetoden de senare eluerande komponenterna för att få dem att eluera snabbare, vilket ger en smal topp i kromatogrammet. Denna metod förbättrar även toppformen och topphöjden. Vidare, i gradientelueringsteknik, ändras elueringsordningen med ändringarna i kolumndimensionerna.
Vad är skillnaden mellan isokratisk och gradienteluering?
Termen isokratisk och gradienteluering används i kromatografi. Isokratisk och gradienteluering beskriver egenskaperna hos den mobila fasen. Den viktigaste skillnaden mellan isokratisk och gradienteluering är att isokratisk eluering hänvisar till upprätthållandet av en konstant koncentration i den mobila fasen medan gradienteluering hänvisar till upprätthållandet av en varierande koncentration i den mobila fasen.
I den isokratiska elueringstekniken ökar toppbredden linjärt med retentionstiden. I gradientelueringstekniken minskas emellertid retentionen av de senare eluerande komponenterna, så att elueringen blir snabbare och ger smala toppar. Bortsett från det, i den isokratiska elueringen, beror inte selektiviteten på kolumndimensionerna, men vid gradienteluering ändras selektiviteten med ändrade kolumndimensioner.
Följande tabell sammanfattar skillnaden mellan isokratisk och gradienteluering.
Sammanfattning – Isocratic vs Gradient Elution
Isokratisk eluering och gradienteluering beskriver egenskaperna hos den mobila fasen. Den viktigaste skillnaden mellan isokratisk och gradienteluering är att isokratisk eluering hänvisar till upprätthållandet av en konstant koncentration i den mobila fasen medan gradienteluering hänvisar till upprätthållandet av en varierande koncentration i den mobila fasen.
