Nyckelskillnad – Stacking Gel vs Separing Gel
Termen stacking gel och separation gel används för att förklara SDS-PAGE-tekniken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores är en laboratorieteknik som används för att separera proteinmolekyler baserat på deras molekylvikter. Teorin bakom tekniken är att proteiner med olika molekylvikter uppvisar olika migrationshastigheter; molekyler med låg molekylvikt migrerar snabbare medan molekyler med hög molekylvikt migrerar långsamt. Mediet för migrering är en gel. Det finns två typer av geler som heter staplingsgel och separeringsgel. Den viktigaste skillnaden mellan staplingsgel och separeringsgel är att staplingsgelens pH är 6,8 medan pH för separeringsgelen är 8,8.
Vad är Stacking Gel?
Stacking gel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösningsgel (separerande gel) i SDS-PAGE-teknik. Staplingsgelen används för att förbättra upplösningen av elektrofores. Upplösningen ökar på grund av skillnaden mellan koncentrationer av staplingsgel och upplösningsgel som påverkar proteinerna i provet. Eftersom koncentrationen av polyakrylamid i staplingsgelen är låg är porstorleken högre. Detta hjälper också till att öka separationen.
Stacking-gelen är en lös polyakrylamidgel med stora porer av cirka 7% polyakrylamid. Dessa porer fungerar inte som en betydande barriär för stora proteinmolekyler. Därför påverkar denna gel något på rörligheten hos dessa proteiner. Detta gör separation enligt rörligheten och storleken av protein genom att koncentrera dem mellan två geler.
Figur 01: SDS-PAGE Akrylamid Gel
Ph-geléns pH är 6,8. Dess pH är surt än för upplösning av gel med 2 pH-enheter. Detta pH innebär en lägre jonstyrka och därmed ett högre elektriskt motstånd. Detta provocerar rörligheten hos proteiner än andra laddade partiklar som finns i gelén.
Vad är Separating Gel?
Separerande gel eller resolving gel av en SDS-PAGE-teknik är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av lågkoncentrerad staplingsgel. Den separerande gelén innehåller en hög mängd polyakrylamid (10%). pH för denna gel bibehålls som pH=8,8, vilket är en högre pH-nivå än staplingsgelen.
Figur 02: En gelelektroforesapparat
När proteinmolekylerna når separeringsgelen saktas migrationen av dessa molekyler ner eftersom den separerande gelén är en högkoncentrationsgel med liten porstorlek som kan fungera som en avsevärd barriär för proteinmolekylernas rörelse. Denna långsammare gör att de andra proteinerna migrerar långsamt för att komma ikapp, vilket resulterar i ett sm alt, koncentrerat band mellan de två gelerna.
Vilket är förhållandet mellan Stacking Gel och Separing Gel?
Både typerna Stacking Gel och Separing Gel används i samma apparat
Vad är skillnaden mellan Stacking Gel och Separing Gel?
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Stacking gel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösningsgel (separerande gel) i SDS-PAGE-teknik. | Separerande gel eller resolving gel av en SDS-PAGE-teknik är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av en lågkoncentrerad staplingsgel. |
| Placering | |
| Stacking gel placeras på den lösande (separerande) gelen. | Separerande gel placeras på botten av behållaren som används för gelelektrofores. |
| Koncentration | |
| Koncentrationen av staplingsgelen är hög. | Koncentrationen av separerande gel är låg. |
| Polyakrylamid innehåll | |
| Stacking gel innehåller cirka 7 % polyakrylamid. | Separerande gel innehåller cirka 10 % polyakrylamid. |
| pH | |
| Staplingsgelens pH är 6,8. | pH för den separerande gelén är 8,8. |
| Porstorlek | |
| Stora porstorlekar finns i staplingsgelen. | Små porstorlekar finns i separerande gel. |
| Resolution | |
| Stacking gel ger bättre upplösning. | Separerande gel ger dålig upplösning. |
Sammanfattning – Stacking Gel vs Separating Gel
Stacking gel och separation gel är två typer av polyakrylamidgeler som används för att få bättre separation av proteinmolekyler i ett givet prov. Skillnaden mellan staplingsgel och separeringsgel är att staplingsgelens pH är 6,8 medan pH för separeringsgelen är 8,8.
