Nyckelskillnaden mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1 är att Klenow-fragment är en stor del av DNA-polymeras 1 som saknar 5′ till 3′ exonukleasaktivitet medan DNA-polymeras är ett enzym av E. coli som har alla tre domäner inklusive 5′ till 3′ exonukleasaktivitet.
DNA-polymeras är ett av nyckelenzymerna som är involverade i DNA-replikation i levande organismer. Det finns olika former av DNA-polymerasenzym som finns i eukaryoter och prokaryoter baserat på storlek och form. DNA-polymeras 1, 2 och 3 finns endast i prokaryota organismer, och de spelar olika roller i DNA-replikation. DNA-polymeras 1 har tre domäner med 5′ till 3′ polymeras, 3′ till 5′ exonukleasaktivitet och 5′ till 3′ exonukleasaktivitet. Klenow-fragmentet är en proteolytisk produkt av DNA-polymeras 1. Det har 5 till 3'-polymeras- och 3'- till 5'-exonukleasaktiviteter av intakt DNA-polymeras 1, men det saknar 5'- till 3'-exonukleasaktiviteten.
Vad är Klenow Fragment?
Klenow-fragment är en stor del av DNA-polymeras 1. Till skillnad från DNA-polymeras 1, ses inte 5' till 3' exonukleasaktivitet i Klenow-fragmentet eftersom det saknar den 5' till 3' framåtriktade exonukleasdomänen. Klenow-fragment framställs genom att smälta DNA-polymeras 1 med ett proteas som kallas subtilisin, som är ett proteinnedbrytande enzym. I vissa tillämpningar blir 3' till 5' exonukleasaktiviteten hos Klenow-fragmentet oönskad. Det kan tas bort genom att införa en mutation i genen som kodar för Klenow-fragmentet. Det resulterande enzymet som endast har 5'- till 3'-polymerasaktiviteten är känt som exo-Klenow-fragmentet. Morfologiskt liknar Klenow-fragmentet den mänskliga högra handen. Den har N-terminal 3'-5' exonukleasdomän och den C-terminala polymerasdomänen separerade med cirka 30 A.
Figur 01: Klenow-fragment och DNA-polymeras 1
Klenow-fragment är ett viktigt verktyg i molekylärbiologiska tekniker. Klenow-fragment har flera användningsområden. De är extremt viktiga vid kloning med trubbiga ändar för att producera trubbiga fragment. Klenow-fragment kan ta bort 3′ överhäng eller fylla 5′ överhäng för att bilda trubbiga ändar. Dessutom används Klenow-fragment för att syntetisera dubbelsträngat DNA från enkelsträngar. Dessutom används de för att framställa radioaktivt märkta sönder med användning av 5'- till 3'-DNA-beroende DNA-polymerasaktivitet.
Vad är DNA-polymeras 1?
DNA-polymeras 1 (Pol 1) är ett enzym som finns i prokaryoter och som behövs för bakteriell DNA-replikation. Det är den första typen av DNA-polymeras som upptäcktes av Arthur Kornberg 1956. Pol 1 är det vanligaste polymeraset i E. coli. Den kodas av genen polA och består av 928 aminosyror. Den består av tre domäner. Alla tre domänerna fyller olika funktioner. Två domäner utför 5′ till 3′ exonukleasaktivitet och 3′ till 5′ exonukleasaktivitet. På grund av denna aktivitet som Pol 1 besitter är det populärt som ett DNA-reparationsenzym snarare än ett DNA-replikerande enzym. Den tredje domänen har förmågan att katalysera flera polymerisationer (5′ till 3′) före frisättningen av mall-DNA:t och koppla ihop Okazaki-fragment genom att fylla nytt DNA och ta bort RNA-primrar.
Figur 02: DNA-polymeras
Pol 1 isolerad från E Coli användes flitigt i molekylära tillämpningar. Men när Taq Polymerase upptäcktes ersatte det E Coli Pol 1 i PCR-teknik. Taq-polymeras är ett slags termostabilt DNA-polymeras som tillhör Pol 1.
Vilka är likheterna mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1?
- Klenow-fragment är en stor del av DNA-polymeras 1.
- De har 5'till 3′ DNA-beroende DNA-polymerasaktivitet och 3'till 5′ exonukleasaktivitet som förmedlar korrekturläsning.
- De används för flera ändamål.
Vad är skillnaden mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1?
Nyckelskillnaden mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1 är att Klenow-fragmentet saknar 5′ till 3′ exonukleasaktivitet medan DNA-polymeras 1 har 5′ till 3′ exonukleasaktivitet. Därför har Klenow-fragmentet två domäner, medan DNA-polymeras 1 har alla tre domänerna.
Infografiken nedan visar mer detaljer om skillnaden mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1.
Sammanfattning – Klenow Fragment vs DNA Polymerase 1
DNA-polymeras 1 är ett enzym av E. coli som har tre domäner som 5′ till 3′ polymerisationsdomän, 3′ till 5′ exonukleasdomän och 5′ till 3′ exonukleasdomän. Klenow-fragment är en stor del av DNA-polymeras. Den saknar en domän av DNA-polymeras 1, som är 5' till 3' exonukleasdomänen. Den viktigaste skillnaden mellan Klenow-fragment och DNA-polymeras 1 är att Klenow-fragment inte har 5′ till 3′ exonukleasdomän medan DNA-polymeras 1 har 5′ till 3′ exonukleasdomän.
