Nyckelskillnaden mellan jäst en hybrid och jäst två hybrid är att jäst en hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera DNA-protein-interaktioner medan jäst två-hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera protein-protein-interaktioner.
Att studera interaktioner mellan cellulära molekyler kan hjälpa till att definiera igenkänningsställen involverade i genuttryck och proteinvägar. DNA- och proteininteraktioner är integrerade i cellulära processer såsom DNA-modifieringar och transkriptionsreglering, etc. Å andra sidan spelar protein- och proteininteraktioner viktiga roller i cellulära processer som replikering, transkription, translation och sign altransduktion. Därför är det ytterst viktigt att identifiera dessa interaktioner mellan cellulära molekyler genom olika analyser. Jäst en hybrid och jäst två hybrid är två in vitro-baserade analyser för att analysera DNA-protein- och protein-protein-interaktioner.
Vad är Yeast One Hybrid?
Jäst en hybrid (Y1H) är en in vitro-baserad analys för att analysera intracellulära DNA-proteininteraktioner. Denna metod etablerades först av Wang och Reed 1993. Sedan dess har den visat en större kraft inom biologisk forskning. I denna analys finns det två huvudkomponenter: DNA-bete och proteinbyten.
Figur 01: Yeast One Hybrid
I proceduren klonas först en DNA-sekvens (DNA-bete) uppströms om två olika reportrar (HIS3, LacZ). Dessa reporterkonstruktioner är integrerade i genomet av en jäststam. Transkriptionsfaktorer tas som proteinbyten. Transkriptionsfaktorer fuseras till transkriptionsaktiveringsdomänen (AD) av jäst Gal4 transkriptionsfaktor för att göra hybridproteiner. Hela detta hybridprotein integreras i en plasmid innan det introduceras i jäststammen. Efter introduktionen av den rekombinanta plasmiden, när transkriptionsfaktorn interagerar med DNA-fragmentet, aktiverar AD-delen reportergenexpressionen (HIS3 eller LacZ). Sekvensering av plasmiderna möjliggör identifiering av den transkriptionsfaktor som kan binda till DNA-fragmentet. Nyligen användes jäst en hybridmetod för att undersöka sjukdomsdiagnostik. Därför kommer denna analys i framtiden att användas mer allmänt inom vetenskaplig forskning och medicinska behandlingar.
Vad är Yeast Two Hybrid?
Jäst två hybrid (Y2H) är en in vitro-baserad analys för att analysera intracellulära protein- och proteininteraktioner. Denna metod hittades ursprungligen av Stanley Fields och Ok-Kyu Song 1989. Denna teknik detekterar protein-protein-interaktioner med hjälp av Gal4-transkriptionsfaktorn för jästen.
Figur 02: Yeast Two Hybrid
I denna metod konstrueras först två fusioner (hybrider) med hjälp av proteiner av intresse: fusion av ett protein med DNA-bindande domän (DBD) och genom att fusionera det andra proteinet med aktivatordomänen (AD) av Gal4-transkriptionsfaktorn. Proteinet fusionerat med DBD är känt som bete medan proteinet fuserat med AD är känt som byte. I jäststammen, vid växelverkan mellan betet och bytet, bringas DBD och AD i omedelbar närhet för att generera en funktionell Gal4-transkriptionsfaktor uppströms om reportergenen. Den funktionella transkriptionsfaktorn aktiverar reportergenuttryck. Dessutom används denna metod för närvarande för att screena interaktionerna mellan integrala membranproteiner i däggdjursceller.
Vilka är likheterna mellan Yeast One Hybrid och Yeast Two Hybrid?
- Jäst en hybrid och jäst två hybrid är två in vitro-baserade analyser för att analysera DNA-protein- och protein-protein-interaktioner.
- Dessa analyser använder jäststammar.
- Båda analyserna använder aktiveringsdomänen (AD) för Gal4-transkriptionsfaktorn.
- De använder uttryck av reportergen (HIS3 eller LacZ) för att detektera interaktioner.
- De har bete och byte.
- Båda analyserna är mycket användbara i modern biologisk forskning.
Vad är skillnaden mellan Yeast One Hybrid och Yeast Two Hybrid?
Jäst en hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera DNA- och proteininteraktioner medan jäst två-hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera protein- och proteininteraktioner. Således är detta nyckelskillnaden mellan jäst en hybrid och jäst två hybrid. Vidare, i en hybrid av jäst, är bete ett DNA-fragment och byte är en proteinmolekyl. Å andra sidan, i jäst två hybrider är både bete och byte proteinmolekyler.
Infografiken nedan listar skillnaderna mellan jäst en hybrid och jäst två hybrid i tabellform för jämförelse sida vid sida.
Sammanfattning – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Jäst en hybrid och jäst två hybrid är två viktiga in vitro-baserade analyser. Jäst en hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera DNA- och proteininteraktioner medan jäst två-hybrid är en in vitro-baserad analys för att analysera protein- och proteininteraktioner. Detta är alltså den viktigaste skillnaden mellan jäst en hybrid och jäst två hybrid.
