Nyckelskillnaden mellan Coomassie- och silverfärgning är att coomassie-färgning är en proteinfärgningsteknik som använder en coomassie briljantblå färg, medan sliverfärgning är en proteinfärgningsteknik som använder en silverfärgning.
Proteinseparation och identifiering är kritiska steg i proteomanalys. De behöver högupplöst proteinkarakterisering efter gelelektrofores. Det finns många färgningstekniker som inkluderar olika färgämnen såsom anjoniska färgämnen (coomassie brilliant blue), metallkatjoner (imidazol-zink), silverfärgning och fluorescerande färgämnen, etc. Ibland kan radioaktiva sonder också användas. Valet av färgningsteknik beror på enkelheten, tillgängligheten av bildutrustning i laboratoriet, etc.
Vad är Coomassie Staining?
Coomassie-färgning är en proteinfärgningsteknik som använder en coomassie briljant blå färg. Det kallas allmänt coomassie blue-tekniken. Coomassie brilliant blue är det mest populära anjoniska proteinfärgämnet. Denna färg färgar norm alt nästan alla proteiner med god kvantitativ linjäritet vid medelhög känslighet. Coomassie brilliant blue stain binder ospecifikt till nästan alla proteiner. Det finns två olika varianter av coomassie brilliant blue bets: R-250 och G-250. R-250 ger kortare färgningstider, medan G-250 finns i mer känsliga och miljövänliga formuleringar.
Figur 01: Coomassie Staining
Coomassie-färgämnen är mycket populära i masspektrometristudier och proteinidentifieringsstudier. Dessutom är biosäker coomassie stain en ofarlig formulering av coomassie blue G-250 som för närvarande finns tillgänglig på marknaden. Fördelen med denna formulering är att den endast kräver vatten för sköljning och avfärgning. Biosäker coomassie-färgning ger en känslighet motsvarande konventionell coomassie-blå G-250 men bättre än coomassie-färgning R-250. Dessutom har den ett enklare och snabbare färgningsprotokoll än den konventionella Coomassie blue G-250. Nackdelen med coomassie blå färgning är att den är mindre känslig jämfört med silverfärgning. Coomassie blå färgning är ungefär 50 gånger mindre känslig än silverfärgning. Men på grund av dess enkelhet i bindning är den att föredra i många studier.
Vad är silverfärgning?
Silverfärgning är en proteinfärgningsteknik som använder en silverfärgning. Silverfärgning används för att färga både agaros- och polyakrylamidgeler. Silverfärgningen av protein i agarosgeler utvecklades först 1973 av Kerenyi och Gallyas. Senare anpassades den för proteiner i polyakrylamidgeler som används i SDS-PAGE. För närvarande används silverfärgning också för färgning av DNA eller RNA. För att färga gelerna inkuberas gelerna med silvernitratlösning i denna metod. Silverfärgning färgar ställen där proteiner finns från brunt till svart.
Figur 02: Silverfärgning
Intensiteten av silverfärgningen beror på proteinets primära struktur. Dessutom kan renheten hos de använda kärlen och renheten hos reagenser också påverka kvaliteten på silverfärgning. Nackdelen med silverfärgning är dock att den inte kan detektera alla proteiner, särskilt glykoproteiner och proteiner med stora modifierade grupper fästa vid sina sidokedjor.
Vilka är likheterna mellan Coomassie och Silverfärgning?
- Coomassie- och silverfärgning är två tekniker som används vid proteinfärgning.
- De kan färga både proteiner och DNA.
- Båda färgningsteknikerna har nackdelar.
- De här teknikerna har liknande steg, såsom fixering, färgning och avfärgning.
Vad är skillnaden mellan Coomassie och Silverfärgning?
Coomassie-färgning är en proteinfärgningsteknik som använder coomassie brilliant blue-färgning, medan sliverfärgning är en proteinfärgningsteknik som använder silverfärgning. Detta är alltså den viktigaste skillnaden mellan Coomassie och silverfärgning. Dessutom är Coomassie-färgning mindre känslig än silverfärgning.
Infografiken nedan listar skillnaderna mellan Coomassie och silverfärgning i tabellform för jämförelse sida vid sida.
Sammanfattning – Coomassie vs Silver Staining
För att visualisera proteiner kan en proteinspecifik färgämnesbindande eller färgproducerande kemisk reaktion utföras. Detta kallas proteinfärgning. Coomassie och silverfärgning är två tekniker som används vid proteinfärgning. Coomassie-färgningsteknik använder coomassie briljant blå färg medan flisfärgning använder silverfärgning. Så detta är den viktigaste skillnaden mellan Coomassie och silverfärgning.
