Nyckelskillnaden mellan immunfällning och koimmunfällning är att immunfällning är en teknik som fäller ut ett protein ur lösningen med hjälp av en specifik antikropp, medan samimmunfällning är en teknik som fäller ut intakta proteinkomplex ur lösningen med hjälp av en specifik antikropp.
Antigen-antikroppsinteraktion är en specifik kemisk interaktion mellan antikroppar som produceras av B-celler och antigener (proteiner) under en immunreaktion. Norm alt kombineras lösliga antigener med lösliga antikroppar i närvaro av en elektrolyt vid löslig temperatur och pH för att göra ett olösligt synligt komplex. Detta kallas en utfällningsreaktion. Därför är immunfällning och samimmunfällning två typer av fällningsreaktioner som rutinmässigt används i laboratorier för att identifiera proteiner som antigener.
Vad är immunfällning?
Immunoutfällning är en teknik för att fälla ut ett protein ur en lösning med hjälp av en specifik antikropp. Ibland är denna teknik också känd som individuell proteinimmunutfällning. Immunfällning använder en antikropp för att isolera ett utv alt protein av intresse från cellysat. Antikroppen renar sitt specifika målprotein eller antigen från en blandning. Antikroppen binder till proteinet och antikropp-antigenkomplexet dras ut ur provet. I den experimentella uppställningen dras antigen-antikroppskomplexet ut med hjälp av protein A/G-kopplad agaros eller magnetiska pärlor. Senare tvättas pärlorna och proteinet av intresse elueras. Det renade proteinet eller antigenet som erhålls genom immunfällning verifieras med en mängd olika tekniker såsom enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) och western blöt (WB).
Figur 01: Immunfällning
Dessutom kan isolerade proteiner eller antigener kvantifieras och identifieras genom masspektrometri genom att använda enzymatiska digestionsmönster baserat på den primära sekvensen. Det finns vissa överväganden innan du startar ett immunoutfällningsexperiment: val av metodformat, bindning av proteiner och pärlor, val av rätt primär antikropp och isotyp och negativ kontroll.
Vad är Coimmunoprecipitation?
Coimmunoprecipitation är en teknik för att fälla ut intakta proteinkomplex ur lösningen med hjälp av en specifik antikropp. Samimmunutfällning fungerar i allmänhet genom att välja en specifik antikropp som riktar sig mot ett känt protein (antigen) som tros vara en medlem av ett större komplex av proteiner. Genom att rikta den kända medlemmen med en specifik antikropp är det möjligt att dra ut hela proteinkomplexet ur lösningen. Detta gör det möjligt att identifiera de okända medlemmarna i komplexet. Konceptet att dra ut proteinkomplex ur lösningen kallas ibland för en "pull-down"-mekanism.
Figur 02: B Coimmunoprecipitation
Coimmunoprecipitation är en kraftfull teknik som används för att analysera protein-protein-interaktioner. Huvudsyftet med coimmunoprecipitation är identifieringen av interagerande partners såsom ligander, kofaktorer eller signalmolekyler till proteinet av intresse. Dessutom är koimmunoutfällning en effektiv teknik som används för att separera proteiner från serum, cellysat, homogeniserad vävnad eller konditionerade media.
Vilka är likheterna mellan immunutfällning och samimmunutfällning?
- Immunfällning och samimmunfällning är två typer av fällningsreaktionsbaserade tekniker.
- Båda teknikerna kan användas för att identifiera målantigen genom en specifik antikropp.
- Båda teknikerna är starkt beroende av antigen-antikroppsinteraktion.
- De används rutinmässigt i kliniska laboratorier.
Vad är skillnaden mellan immunfällning och samimmunfällning?
Immunoprecipitation är en teknik som fäller ut ett protein ur lösningen med hjälp av en specifik antikropp, medan coimmunoprecipitation är en teknik som fäller ut intakta proteinkomplex ur lösningen med hjälp av en specifik antikropp. Detta är alltså nyckelskillnaden mellan immunfällning och samimmunfällning. Vidare är immunfällning vanligare i laboratorier, medan samimmunfällning inte används vanligtvis i laboratorier.
Infografiken nedan visar skillnaderna mellan immunoutfällning och samimmunoutfällning i tabellform för jämförelse sida vid sida.
Sammanfattning – Immunoutfällning vs Coimmunoprecipitation
Immunfällning och samimmunfällning är två typer av fällningsreaktionsbaserade tekniker som är beroende av interaktion mellan antigen och antikropp. Immunoutfällningstekniken fäller ut ett protein ur lösningen med användning av en specifik antikropp, medan samimmunoutfällningstekniken fäller ut intakta proteinkomplex ur lösningen med användning av en specifik antikropp. Så detta sammanfattar skillnaden mellan immunfällning och samimmunfällning.
