nyckelskillnad – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaserna är nukleaser som specifikt bryter ned RNA till mindre enheter. De kan delas in i två kategorier; endoribonukleaser och exoribonukleaser. Endoribonukleas är ett endonukleas som antingen kan bryta ned enkelsträngat eller dubbelsträngat RNA. Det klyver fosfodiesterbindningarna inom en RNA-polynukleotidkedja. Exemplen är RNas A, RNas III, RNase T1, RNase P och RNase H. Exoribonukleas är ett exonukleas som bröt ner RNA genom att ta bort terminala nukleotider från antingen 5'änden eller 3'änden av RNA-molekylen. Exemplen är RNas R, RNas II, RNas D och RNas PH. Den viktigaste skillnaden mellan RNASE A och RNASE H är att RNase A är ett pankreatisk ribonukleas som specifikt bryter ned enkelsträngat RNA till mindre komponenter medan RNase H är ett ospecifikt enzym som klyver RNA i RNA-DNA-hybrid till mindre enheter via den hydrolytiska mekanismen.
Vad är RNASE A?
RNase A är ett pankreatiskt ribonukleas som specifikt klyver de oparade cytosin- och uracilresterna vid 3'-änden av enkelsträngat RNA. RNase H arbetar vid en högre s altkoncentration (0,3 M eller högre NaCl-koncentration). Den hydrolytiska reaktionen är två steg. Den bildar en 3'-fosforylerad produkt via 2', 3'-cyklisk monofosfat-mellanprodukt. Även om det är specifikt för enkelsträngat RNA vid högre s altkoncentration, kan det också bryta ned dubbelsträngat RNA och RNA i RNA-DNA-hybrid vid lägre NaCl-koncentration (lägre än 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield syntetiserade först detta enzym. RNase A är ett mycket populärt enzym inom molekylär forskning. Bovin pankreas RNase A är ett exempel på RNase A. Och det är ett av de hårdaste enzymerna som används i laboratoriet. Detta enzym behöver ingen kofaktor för sin aktivitet. Det är ett mycket termostabilt enzym. RNas A är det första enzymet och det tredje proteinet till vilket en korrekt aminosyrasekvens detekterades. Detta enzym är mycket litet med 124 aminosyror och en molekylvikt på 12600da. Och den har fyra histidinrester (His 12 och His 119 som involverar en katalytisk reaktion).
Figur 01: RNase A
RNas A kan isoleras genom att koka ett råprov. När det kokar bryter alla andra enzymer ned kvarvarande RNas A. RNase A är ett otroligt stabilt enzym. Detta enzym hämmar med ribonukleasinhibitorprotein, tungmetall- och uridinvanadatkomplex.
Vad är RNase H?
RNase H är ett ospecifikt ribonukleasenzym som kan bryta ner RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. RNase H klyver 3'- O-P-bindningen av RNA i en RNA-DNA-hybrid. I slutändan producerar den 3'OH och 5' fosfatterminerade produkter. I DNA-replikation spelar det en avgörande roll genom att ta bort RNA-primer efter att nya DNA-strängar har bildats. Under laboratorieförhållanden bryter den specifikt ner RNA i RNA-DNA-hybrid men inte DNA och ohybridiserat RNA. Och detta enzym används vanligtvis för att förstöra RNA-mallen efter att den första komplementära DNA-strängen har bildats under cDNA-syntesen.
Figur 02: RNase H
RNase H används också i nukleasskyddsanalyser. Det kan också inkorporeras för att avlägsna poly A-svans från mRNA. RNase H har förmågan att förstöra det icke-kodande RNA:t inuti och utanför cellen. Metalljonerna krävs som kofaktorer för denna proteinaktivitet. En kelator (EDTA) kan användas för att hämma RNase H-enzymet.
Vilka är likheterna mellan RNASE A och RNASE H?
- Båda är proteintill sin natur.
- Båda är endoribonukleas
- Båda kan degradera RNA.
- Båda utför hydrolytiska reaktioner.
- Molekylära laboratorier använder båda dessa.
Vad är skillnaden mellan RNASE A och RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNas A är ett pankreas-ribonukleas som specifikt klyver 3'-änden av oparade cytosin- och uracilrester av enkelsträngat RNA vid högre s altkoncentration. | RNase H är ett ospecifikt ribonukleasenzym som kan bryta ner RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. |
| Naturen hos RNA-klyvning | |
| RNas A klyver specifikt enkelsträngat RNA vid högre s altkoncentration. | RNase H klyver RNA i RNA-DNA-hybrid. |
| Need of Co-factors for Activity | |
| RNase A behöver inte kofaktorer för sin aktivitet. | RNase H behöver metalljoner som kofaktorer för sin aktivitet. |
| Hämmare av proteinaktivitet | |
| Ribonukleasinhibitorprotein, tungmetall- och uridinvanadatkomplex hämmar RNAse A-aktiviteten. | En kelator (EDTA) hämmar RNas H-aktivitet. |
| RNA-primerborttagning i DNA-replikering | |
| RNas A används inte för att ta bort RNA-primer vid DNA-replikation. | RNase H används för att ta bort RNA-primer vid DNA-replikation |
| DNA-mallborttagning i komplementärt DNA (C-DNA) syntes | |
| RNas A används inte för RNA-mallborttagning under komplementär DNA (C-DNA)-syntes. | RNase H används för att ta bort RNA-mall under komplementär DNA (C-DNA) syntes. |
| Borttagning av Poly-A-Tail i mRNA hybridiserat till Oligo (dt) | |
| RNas A används inte för att ta bort "poly-A-svans" i mRNA hybridiserat till oligo (dt). | RNase H används för att ta bort "poly-A-svans" i mRNA hybridiserat till oligo (dt) |
Sammanfattning – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaserna är nukleasenzymer som har förmågan att klyva RNA till mindre enheter. De är två typer; endoribonukleaser och exoribonukleaser. Endoribonukleas är ett endonukleas som har förmågan att bryta ned enkelsträngat eller dubbelsträngat RNA. Och det klyver fosfodiesterbindningen inom en RNA-polynukleotidkedja. RNas A och RNas H är två endoribonukleaser. RNase A är ett pankreatiskt ribonukleas som specifikt klyver oparade cytosin- och uracilrester vid 3'-änden av det enkelsträngade RNA:t vid högre s altkoncentration. RNase H är ett ospecifikt ribonukleasenzym som kan bryta ner RNA i RNA-DNA-hybrid via hydrolytisk reaktion. Detta är skillnaden mellan RNase A och RNase H.
Ladda ner PDF:en RNASE A vs RNASE H
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan RNASE A och RNASE H
