nyckelskillnad – transformanter vs rekombinanter
Rekombination och transformation är två avgörande steg i genteknik, där egenskaperna hos en organism medvetet modifieras genom att manipulera dess genetiska material. Rekombination är en process där främmande DNA inkorporeras i ett vektorgenom och en rekombinant DNA-molekyl bildas. Transformation är nästa steg i vilket rekombinant molekyl förs in i värdorganismen. Värdcellen eller organismen underlättar uttrycket av den rekombinanta molekylen. Den viktigaste skillnaden mellan transformanter och rekombinanter är att transformanter är cellerna eller organismerna som tar rekombinant molekyl inuti och underlättar uttryck medan rekombinanter är vektorerna som tillåter införande av det främmande DNA:t i dess genom och transport in i värdtransformanter för uttryck.
Vad är transformanter?
Transformanter är de celler eller organismer i vilka rekombinant DNA tas upp för uttrycket. Bakterier används ofta som värdorganismer inom genteknik eftersom de är lätta att odla, föröka och hantera under laboratorieförhållanden och transformationsprocessen är enkel jämfört med andra organismer. Den mest populära värdbakterien som används inom genteknik är bakterien E coli.
Under transformationsprocessen induceras värdceller att ta upp rekombinanterna. Vissa värdceller tar dock inte upp rekombinanta molekyler. De är kända som icke-transformanter och cellerna som innehåller rekombinanta DNA-molekyler inuti är kända som transformanter. Selektion av transformanter från icke-transformanter görs med användning av selekterbara markörer inom molekylärbiologi. Valbara markörer infogas i vektorgenomet tillsammans med DNA-insättningen. Vanligt använda selekterbara markörer är antibiotikaresistenta gener. Markörgener underlättar differentieringen av transformanter och fortsätter processen. Efter omvandlingsprocessen odlas bakterien i ett medium som innehåller antibiotika. Endast transformanterna kan växa på det mediet eftersom de har rekombinanterna inuti.
När den rekombinanta DNA-molekylen har transformerats inuti värdorganismen, kan det främmande DNA:t antingen integreras i värdcellens genom eller förbli icke-integrerat i cytoplasman. Uttrycket och replikeringen av det främmande DNA:t sker emellertid i värdorganismen och ger det önskade resultatet av processen.
Vad är rekombinanter?
En rekombinant är en organism eller en cell som har ett rekombinerat genom som innehåller främmande DNA. Rekombinanter är ett resultat av gentekniken. De är konstgjorda konstruerade in vitro genom att infoga generna av intresse och modifiera genomet. Ofta fungerar bakteriella plasmider och bakteriofager som rekombinanter inom genteknik. Den har chimär av olika DNA. Rekombinant DNA-molekyl bär främmande DNA till värdorganismen och får det att uttrycka och bilda den önskade produkten.
Rekombinanta molekyler konstrueras med användning av restriktionsendonukleaser och DNA-ligaser. Det önskade DNA-fragmentet separeras från den ursprungliga organismen och sätts in i vektorn för att göra rekombinant för transformation. Klippning av genen av intresse och öppning av vektororganismen bör göras med samma restriktionsenzym för att skapa kompatibla klibbiga ändar för att sammanfoga dem. När det främmande DNA:t har inkorporerats i vektorgenomet kallas det rekombinant eller den rekombinanta DNA-molekylen.
Figur 02: Rekombinant DNA
Vad är skillnaden mellan transformanter och rekombinanter?
Transformanter vs rekombinanter |
|
| Transformanter är de celler som har en rekombinant DNA-molekyl inuti. | Rekombinanter är bärarmolekyler som har främmande DNA infogat i det egna genomet. |
| Uttryck av främmande DNA | |
| De är värdcellerna som kan uttrycka det rekombinanta DNA:t. | De bör kunna replikera sig själva inom värdorganismen. |
| Utval | |
| Celler som enkelt kan odlas och föröka sig väljs ut som värdceller. | De måste vara lätta att extrahera och bör innehålla valbara markörer. |
Sammanfattning – Transformanter vs rekombinanter
Transformanter är cellerna eller organismerna med rekombinanta DNA-molekyler inuti dem. Rekombinanter är de organismer eller celler som har genomgått genetisk rekombination och har främmande DNA i sina genom. Bakterieceller används ofta som värdceller för transformation och plasmider och bakteriofager används ofta som vektorer i rekombinant DNA-teknik. Detta är skillnaden mellan transformanter och rekombinanter.
