Nyckelskillnaden mellan tot alt cellantal och livskraftiga celler är att det totala cellantal uppskattar alla celler inklusive både levande och döda mikrobiella celler i ett prov medan antalet livsdugliga celler endast uppskattar de levande mikrobiella cellerna i ett prov.
Att räkna antalet organismer inom en population anses nödvändigt för de flesta experimentella arbeten. Därför försöker vi analysera antalet mikrober i ett prov med hjälp av direkta och indirekta metoder. Direkta mätningar involverar metoder som räknar cellantal direkt. Indirekta mätningar innebär att man mäter någon parameter som kan relateras till cellantal såsom celldensitet, torrvikt etc. Vissa metoder kvantifierar endast de levande mikrobiella cellerna i ett prov. Antal livsdugliga celler är en sådan metod. Direkt mikroskopisk räkning kvantifierar alla celler i en känd volym medium/prov med hjälp av ett mikroskop. Därför räknar den både levande och döda celler. Det är en typ av tot alt cellantal.
Vad är tot alt antal celler?
Tot alt cellantal är metoden som går ut på att räkna alla celler i en känd volym medium/prov med hjälp av ett mikroskop och en räknekammare (hemocytometer). Till skillnad från livskraftiga räkningar räknas både levande och döda celler. Därför är detta en total räkning om inte en livskraftsfärg appliceras under observationen. I mikroskopi observeras cellerna direkt under mikroskopet och räknas. Den använder en cellsuspension som består av mikrobiella celler. För enkel räkning och noggranna mätningar kan utspädning av provet göras. I mycket höga/låga koncentrationer av celler är det en svår uppgift att få fram det totala cellantalet med hjälp av ett mikroskop.
Figur 01: Räknekammare – Hemocytometer
Räknekammare är enkla, billiga och tar snabbt ett tot alt antal celler. Viktigast av allt är att räknekammare är användbara för att räkna både eukaryoter och prokaryoter. Vi räknar celler i utvalda kvadrater med känd volym för att kvantifiera det totala cellantalet.
Vad är Viable Cell Count?
Viable cell count är en metod för att räkna levande mikrobiella celler i ett prov. Den räknar bara levande celler i provet. Antal livsdugliga plattor, membranfiltrering och det mest sannolika antalet är få tekniker för att räkna livsdugliga celler. Dessa tillvägagångssätt är tillväxtbaserade. Viable plate count-metoden är en kraftfull metod som används inom många mikrobiologiska områden, inklusive livsmedels- och mejerimikrobiologi, medicinsk mikrobiologi, miljömikrobiologi, mikrobiell genetik, utveckling av tillväxtmedier och bioteknik.
Det vanligaste sättet att räkna livsdugliga bakterier är att använda ett prov som kan bilda kolonier på ett agarmedium. Det finns två huvudsakliga sätt att utföra en tallrikräkning: spridningsplåtsteknik och hällplåtsteknik. En känd provvolym kan antingen spridas på ytan av en agarplatta eller blandas in i agaren. Plattan inkuberas sedan och de uppkomna kolonierna räknas. Antalet kolonier är relaterat till antalet mikroorganismer i det ursprungliga provet. Viable counts mäter bara de celler som lever och växer.
Figur 02: Viable Plate Count
Most probable number (MPN) är ett alternativ till platträkningsmetoder för att uppskatta populationstätheten för livskraftiga celler. Den räknar organismer som växer i flytande kultur och är således en övervägande bakteriologisk teknik. Det är särskilt användbart för låga koncentrationer av organismer, t.ex. mjölk, dricksvatten.
Membranfiltreringsteknik är mer lämplig när mikrober är mycket utspädda som i en stads vattenförsörjning. Det görs helt enkelt genom att passera en känd volym av vätskan genom ett filter och inkubera den på ett näringsmedium. Kolonier som utvecklas på filtret räknas och bakterierna per milliliter av provet beräknas.
Vilka är likheterna mellan tot alt cellantal och livskraftiga celler?
- Tot alt cellantal och livskraftiga celler är två typer av mikrobiella tekniker som kvantifierar celler.
- De är vanliga uppräkningstekniker i mikrobiologiska laboratorier.
Vad är skillnaden mellan tot alt antal celler och antal livskraftiga celler?
Tot alt cellantal räknar upp alla levande och döda mikrobiella celler i ett prov. Däremot räknar antalet livsdugliga celler endast upp de levande cellerna i ett prov. Så detta är nyckelskillnaden mellan tot alt cellantal och livskraftigt cellantal. Tot alt antal celler är oberoende av tillväxten av kolonier på agarplattor medan antalet livsdugliga celler är en tillväxtbaserad teknik och det beror på tillväxten av mikrobiella kolonier på agarplattor.
Informationsgrafiken nedan sammanfattar skillnaden mellan tot alt cellantal och livskraftiga celler.
Sammanfattning – Tot alt antal celler vs antal levande celler
Tot alt cellantal räknar upp både levande och döda mikrobiella celler medan antalet livsdugliga celler endast räknar upp de levande cellerna. Detta är alltså nyckelskillnaden mellan tot alt cellantal och livskraftigt cellantal. Dessutom är antalet livsdugliga celler en tillväxtbaserad teknik, till skillnad från tot alt antal celler. Dessutom kräver det inkubation av plattor tills man får de synliga kolonierna. Antal livsdugliga plattor, MPN och membranfiltrering är få tekniker för antal viabla celler medan direktmikroskopi och användning av hemocytometer är två tekniker för tot alt cellantal.
