Nyckelskillnad – HPLC vs HPTLC
Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och HPTLC är att HPLC tillåter kvantitativ separation av komponenter i ett prov medan HPTLC inte tillåter kvantitativ separation av komponenter i ett prov.
Kromatografi är en fysisk separationsmetod som används för att separera och identifiera komponenterna i en blandning. Både HPLC och HPTLC är kromatografiska tekniker. HPLC är högpresterande vätskekromatografi. HPTLC är högpresterande tunnskiktskromatografi.
Vad är HPLC?
HPLC är högpresterande vätskekromatografi. Det är en analytisk teknik som används för att separera, identifiera och kvantifiera komponenter i en blandning. I denna teknik löses provet i ett lämpligt lösningsmedel. Därefter leds lösningsmedlet med provet genom en pump med ett givet tryck. Pumpen är fylld med fast adsorberande material. Då binder vissa komponenter starkt till det absorberande materialet medan andra komponenter binder löst. Detta gör att komponenterna får olika flödeshastigheter genom pumpen. Därför kan komponenterna enkelt separeras.
Figur 01: Ett HPLC-system
Adsorbentmaterialet som fyller pumpen kallas den stationära fasen. Lösningsmedlet med det lösta provet är känt som den mobila fasen. Pumpen som används i denna teknik kallas kolonnen. Kolonnen är fylld med ett adsorberande material, oftast kiseldioxidpartiklar. Storleken på dessa partiklar kan variera från 2-50 μm. Separationsprocessen påverkas av den mobila fasens sammansättning och systemets temperatur. Interaktionerna mellan den stationära fasen och komponenten i provet kan vara hydrofoba interaktioner, dipol-dipol-interaktioner, jonbindning, etc.
Driftstrycket för HPLC är avsevärt högre än det för traditionell vätskekromatografi. Den ligger runt 50-350 bar. Skillnaden mellan vätskekromatografi och HPLC är att vid vätskekromatografi faller provet genom kolonnen under gravitation medan, vid HPLC, provet trycksätts genom kolonnen. Storleken på kolonnen och de absorberande partiklarna är också mycket små jämfört med traditionell vätskekromatografi. Upplösningen som ges av HPLC-tekniken är dock överlägsen.
Vad är HPTLC?
HPTLC är högpresterande tunnskiktskromatografi. Det är den avancerade och automatiserade formen av traditionell TLC. Denna teknik ger en effektiv upplösning på en kort tidsperiod. I denna analysmetod kan provet och en referens analyseras samtidigt, vilket gör att provet kan jämföras med referensen. Det ger en förbättrad analytisk noggrannhet än andra kromatografiska tekniker. Tiden det tar för analysen är kortare. Tekniken är en lågkostnadsteknik.
Figur 02: En analys av matfärger med HPTLC
HPTLC-metoden är en enkel process, och provberedningssteget är också eliminerat (I traditionell TLC ingår provberedningssteget före separationen. Detta steg involverar rengöring och anrikning). Lösningsmedlet kan användas direkt utan någon förbehandling även om andra kromatografiska tekniker kräver förbehandlingar såsom avgasning, filtrering, etc.
Adsorbentmaterialet som används i HPTLC är kiseldioxid med mycket små partikelstorlekar. I traditionell TLC är partikelstorleken för kiseldioxid 5-20 μm medan den i HPTLC är 4-8 μm. Provet appliceras på HPTLC-plattan med användning av en applikator. Det ger en enhetlig och säker applicering. Sedan placeras plattorna i en kammare med den mobila fasen. Kammaren ska vara mättad med ånga från den mobila fasen. Efter HPTLC-processen kan fläckarna som har rört sig detekteras. När fläckarna på plattan detekteras använder HPTLC-tekniken en lämplig UV-region eller en jodkammare.
Vad är skillnaden mellan HPLC och HPTLC?
HPLC vs HPLTLC |
|
| HPLC är högpresterande vätskekromatografi. | HPTLC är högpresterande tunnskiktskromatografi. |
| Teknik | |
| I HPLC leds den mobila fasen med lösningsmedlet genom en kolonn fylld med den stationära fasen. | I HPTLC placeras provet på en TLC-platta och placeras inuti en kammare som innehåller den mobila fasen; sedan tillåts provet migrera uppåt plattan tillsammans med den mobila fasen. |
| Measurement | |
| I HPLC används skillnaderna mellan flödeshastigheter för komponenter genom kolonnen för att separera komponenterna i provet. | I HPTLC används skillnaderna mellan tillryggalagda avstånd av varje komponent i provet för att separera komponenterna i provet. |
| Kvantitativ separation | |
| HPLC tillåter kvantitativ separation av komponenter i ett prov. | HPTLC tillåter inte kvantitativ separation av komponenter i ett prov. |
Sammanfattning – HPLC vs HPTLC
HPLC och HPTLC är två kromatografiska tekniker. Den viktigaste skillnaden mellan HPLC och HPTLC är att HPLC tillåter kvantitativ separation av komponenter i ett prov medan HPTLC inte tillåter kvantitativ separation av komponenter i ett prov.
