Den viktigaste skillnaden mellan GFP och EGFP är att GFP är ett vildtypsprotein som ingår i molekylär kloning av icke-däggdjursceller medan EGFP är en förbättrad eller konstruerad typ av GFP som kan användas på däggdjursceller.
Molekylär kloning är en avancerad teknik som forskare använder enormt för att uttrycka proteiner via rekombinant teknologi. I rekombinant DNA-teknologi är det nödvändigt att transformera rekombinant vektor framgångsrikt till värdorganism. Under transformationsprocessen bör det därför identifieras och bekräftas om genen av intresse har transformerats eller inte till värden. För att bedöma detta använder molekylärbiologer flera tekniker. Av dessa tekniker är en reportergen. Dessa reportergener fungerar som selekterbara markörer för att välja rätt transformanter. Sålunda är Green Fluorescent Protein (GFP) och Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) två reporterproteiner som används vid molekylär kloning.
Vad är GFP?
GFP är ett vildtypsprotein som innehåller 238 aminosyrarester och flera valbara regioner av aminosyrasekvenser som skiljer det från de andra fluorescerande proteinerna. Dessutom var detta vildtypsprotein ursprungligen isolerat från Aequorea Victoria; en typ av maneter. Men i naturfenomen kunde maneten producera grön färgfluorescens som svar på vissa stimuli.
Tidigare överraskade detta koncept forskarna och de bestämde sig för att använda det på sin rekombinanta DNA-teknik. Följaktligen använde forskare denna mutanta form av vildtypsgenen som en reportergen i sina genuttrycksstudier. Vildtypsgenen av GFP kan producera ett protein som ger fluorescens vid rumstemperatur eller under UV-ljus. Därför, när den sätts in i transformanterna, uttrycker och producerar den fluorescens. Om fluorescensen resulterar efter transformationsprocessen, bekräftar den framgången för transformationsprocessen. Med enkla ord signalerar fluorescensemission den framgångsrika transformationen av vektorn som bär genen av intresse in i värden.
Figur 01: GFP
På grund av denna anledning fungerar GFP som en in vivo-markör för genuttryck. För närvarande används genteknik för att producera GFP. Det finns också många förbättrade versioner av GFP som EGFP. Detta möjliggör därför effektiv användning av GFP i molekylär kloning och genuttrycksstudier.
Vad är EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein eller EGFP är en förbättrad version av GFP. Med enkla ord kan vi definiera EGFP som en konstruerad version av vildtyps-GFP. När vildtypsgenen hos GFP muterar ger den fördelaktiga effekter. Därför tillåter den muterade genen av GFP uttryck av nya karaktärer, och som ett resultat av det kan vi producera Enhanced GFP med förbättrade egenskaper. Dessutom kan vi introducera mutationer framgångsrikt i vildtyps-GFP-genen med hjälp av bestrålning eller kemiska metoder. Dessa muterade gener producerar sedan EGFP, som har mer fördelaktiga egenskaper.
Figur 02: EGFP
De förbättrade egenskaperna hos EGFP är följande;
- Kan avge starkare fluorescenssignaler.
- Har hög känslighet.
- Kan använda den på däggdjursceller istället för prokaryoter och andra eukaryoter på lägre nivå.
- Ger också ökad renhet hos produkten.
Därför, i jämförelse med GFP, är EGFP det föredragna valet för studier av genuttryck. Produkten är dock dyrare jämfört med GFP.
Vilka är likheterna mellan GFP och EGFP?
- GFP och EGFP är två proteiner som har förmågan att avge grön färg
- Därför fungerar båda som reporterproteiner i genuttrycksstudier.
- Det är också möjligt att syntetisera båda med hjälp av rekombinant DNA-teknik.
- Dessutom är det lätt att ytterligare mutera dessa två typer för att syntetisera förbättrade former.
Vad är skillnaden mellan GFP och EGFP?
Reportergenen är en gen som fäster med genen av intresse i rekombinant DNA-teknik. Det signalerar framgångsrik transformation av den rekombinanta vektorn till värden. Här är GFP och EGFP två typer av gröna fluorescerande proteiner som fungerar som reporterproteiner. Den viktigaste skillnaden mellan GFP och EGFP är dock att GFP är en vildtyp medan EGFP är en konstruerad version av GFP. Dessutom har EGFP mer fördelaktiga egenskaper än GFP. Till exempel producerar EGFP starkare fluorescerande ljus och är känsligare än GFP. En annan skillnad mellan GFP och EGFP är de system där vi kan använda dessa. Icke-däggdjurssystem använder GFP medan däggdjurssystem använder EGFP.
Infografiken nedan visar skillnaden mellan GFP och EGFP i tabellform.
Sammanfattning – GFP vs EGFP
GFP och EGFP är reporterproteiner i molekylär kloning och genuttrycksstudier. GFP är vildtypsproteinet, vilket är ett grönt fluorescerande protein. Proteinet var från början isolerat från maneten Aequorea victoria. Däremot är EFGP en förbättrad form av GFP-protein. Det är en mutant av vildtypen med förbättrade egenskaper. Därför har EFGP högre signalstyrka och högre känslighet. Därför kan vi använda det på däggdjursvektorer. Däremot är användningen av GFP huvudsakligen endast på icke-däggdjursvektorer. Sammantaget är detta skillnaden mellan GFP och EGFP.
