nyckelskillnad – SDS-sida vs Western Blot
Western blotting är en teknik som detekterar ett specifikt protein från ett proteinprov. Denna teknik utförs via flera nyckelsteg: gelelektrofores, blotting och hybridisering. Natriumdodecylsulfat polyakrylamidgelelektrofores (SDS-sida) är en sorts gelelektroforesteknik som används för att separera proteiner efter deras storlekar (molekylvikter). Western blot är ett speciellt ark av ett blotting-membran som används för att överföra samma mönster av proteinerna på SDS-sidan. Den viktigaste skillnaden mellan SDS Page och western blot är att SDS Page tillåter separation av proteiner i en blandning medan western blot tillåter detektion och kvantifiering av ett specifikt protein från en blandning. Båda är användbara i proteinanalysstudier.
Vad är SDS-sida?
SDS-sidan är en gelelektroforesteknik som används för proteinseparation. Det används ofta inom biokemi, genetik, krimin alteknik och molekylärbiologi. När proteinerna har extraherats från provet körs de på en gel som består av SDS och polyakrylamid. SDS är en anjonisk detergent som används för att linjärisera proteiner (denaturera proteiner) och för att ge en negativ laddning till linjäriserade proteiner proportionell mot deras molekylmassa. Polyakrylamid blir det fasta stödet för gelén. Denaturerade proteiner som är negativt laddade migrerar mot den positiva änden av apparaten genom gelén. Beroende på storleken på proteinerna skiljer sig migreringshastigheterna mellan proteiner och separation sker. Därför är SDS-sidan användbar för separation av enskilda proteiner baserat på deras storlekar.
Förberedelsen av polyakrylamidgelen för fraktionering av proteiner är ett avgörande steg i SDS-sidan. Den korrekta koncentrationen av polyakrylamid och typen av tvärbindningsmedel som används påverkar starkt gelens fysikaliska egenskaper, vilket gör den faktiska separationen av de olika proteinerna. Gelens porstorlekar bör hanteras korrekt för effektiv separation. SDS-sidan anses dock vara en högupplöst proteinseparationsteknik.
SDS Page-teknik har en stor begränsning i proteinanalys. Eftersom SDS denaturerar proteiner före separation, tillåter det inte detektering av enzymatisk aktivitet, proteinbindande interaktioner, proteinkofaktorer, etc.
Figur 01: SDS-sida
Vad är Western Blot?
Western blotting-teknik möjliggör detektering av ett specifikt protein från en proteinblandning och mätning av proteinets kvantitet och molekylvikt. Western blot är det membran som används under blottingproceduren för att få en spegelbild av proteinmönstren i SDS-polyakrylamidgelen. Membranet som används för western blotting består till största delen av nitrocellulosa eller polyvinylidendifluorid (PVDF). Membranet med det överförda proteinet kan användas för att identifiera det önskade proteinet. Det kräver högkvalitativ antikropp för detektion av det önskade proteinet genom hybridisering. Antikroppen binder till sitt specifika antigen och avslöjar närvaron av det önskade antigenet som är ett protein.
Överföring av proteinerna från SDS-polyakrylamidgelen till westernblotten utförs genom elektroblotting. Det är en effektiv och snabb metod som får proteinerna att elektrofores ut ur gelén och passerar över på nitrocellulosamembranet (western blot).
Figur 02: Western Blot
Vad är skillnaden mellan SDS Page och Western Blot?
SDS-sida vs Western Blot |
|
| SDS-sidan är en gelelektroforesteknik. | Western blot är en teknik som utförs på ett membran för att detektera ett specifikt protein från en blandning. |
| Använd | |
| SDS-sidan tillåter separation av proteiner enligt deras storlekar. | Western blot tillåter överföring av proteiner på SDS-sidegelen utan att ändra dess mönster och tillåter hybridisering med specifika antikroppar. |
| Nackdelar | |
| Proteindenaturering, höga kostnader och förekomst av neurotoxinkemikalier är nackdelarna med denna teknik. | Denna teknik är tidskrävande och kräver en god erfarenhet av personliga och specifika kontrollerade förhållanden. |
Sammanfattning – SDS-sida vs Western Blot
SDS-sida och western blot är två metoder involverade i proteinanalys. SDS Page tillåter enkel separation av proteiner på en gel enligt deras molekylvikt. Western blot hjälper till att bekräfta närvaron och kvantiteten av ett specifikt protein genom hybridisering med specifika antikroppar. Detta är skillnaden mellan SDS-sida och western blot.
